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文献和实验形式的电泳的优点是节省两性电解质试剂、加样数量多、利于比较不同样品的电泳结果,而且电泳后的固定、染色和干燥都很方便、迅速。水平板式等电聚焦电泳的最大优点是防止了由于电极液的电渗作用而引起pH梯度的漂变。 三、器材及试剂: 1.器材: 稳流稳压电源,水冷式平板等电聚焦电泳电槽,玻璃板(11.5×11.5×0.2cm),大铁文具夹,塑料模具(厚0.5mm,中间开孔9.0×9.0cm),小眼科剪子,镊子,解剖刀,1ml注射器,50μl和100μl微量注射器,擦镜纸,滤纸,精密pH试纸,凝血板
随机引物 适用于长的或具有发卡结构的 RNA。适用于 rRNA、mRNA、tRNA 等所有 RNA 的反转录反应。主要用于单一模板的 RT-PCR 反应。 Oligo dT 适用于具有 PolyA 尾巴的 RNA。(原核生物的 RNA、真核生物的 Oligo dT rRNA 和 tRNA 不具PolyA 尾 巴。)由于 Oligo dT 要结合到 PolyA 尾巴上,所以对 RNA 样品的质量要求较高,即使有少量降解也 会使全长 cDNA 合成量大大减少。 基因特异性引物 与模板序列互补
为剖面)(1)样品胶pH6.7 (2)浓缩胶pH6.7 (3)分离胶pH8.9 (4)电极缓冲液pH8.3图2 夹心垂直板电泳槽示意图 图3 凝胶模示意图1.样品槽模板 2.长玻璃板 1.导线接头 2.下贮槽 3.凹形橡胶框 4.样品槽模板 5.固定螺丝 6.上贮槽 7.冷凝系统(1)样品浓缩效应 (a)凝胶孔径不连续性; (b)缓冲体系离子成分及pH值的不连续性; ●在pH6.7的凝胶缓冲体系中 前导离子或快离子:HCI解离出的氯根(CI
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