NCI-H2228 人肺癌细胞

NCI-H2228人肺癌细胞

产品编号：CL-685h

细胞描述

人非小细胞肺癌细胞，患者不吸烟。细胞生长速度慢，传代一次时间为10-15天。

每个批次均通过本库支原体检测，结果为阴性。在我库通过STR检测无误。

STR鉴定结果为：

Amelogenin: X;

CSF1PO: 12;

D13S317: 11;

D16S539: 11,13;

D5S818: 12;

D7S820: 11;

THO1: 7,8;

TPOX: 11;

vWA: 15,17。

细胞特性

来源：人肺

形态：上皮细胞样，贴壁生长

含量：>1x10⁶cells

规格：T25瓶x1（常温运输）/ 2mL冻存管x2（干冰运输）

用途：仅供科研使用

培养基及培养冻存条件准备

完全培养基	RPMI-1640培养基，87% 优质胎牛血清，10% GlutaMAX-1谷氨酰胺，1% Sodium Pyruvate丙-酮酸钠，1% 双抗，1%
培养条件	气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
冻存液	90%血清 + 10%DMSO，现用现配

细胞接收注意事项

收货当天发现异常，请在24小时内及时联系客服，逾期视为收货良好!

冻存管形式：收货后及时置于-80℃冰箱保存，若长时间不使用，应过夜转移至液氮。复苏时每管一次用完不得留存；

T25形式：①收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁，将T25瓶置于37℃培养箱放置2-4h（视细胞密度而定）稳定细胞状态，镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100x，200x各一张，观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况），以此做为收货依据；②有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中），加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。③运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。  收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代。

 

细胞复苏、传代、冻存操作

（一）冻存细胞的复苏

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8mL完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

（二）细胞传代

待细胞密度达到80%~90%时，即可进行传代培养：

①　弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次；

②　加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4mL含10%FBS的培养基来终止消化；

③　轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8mL完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

（三）细胞冻存

收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25瓶为例：

①　细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/mL；

②　1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1mL冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/mL分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息；

③　将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。

注意事项：

①　所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

②　建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。

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