NCI-H69AR人肺癌细胞

NCI-H69AR人肺癌细胞

产品编号：CL-794h

一、背景描述

H69AR细胞是从一名55岁白人男性癌症患者肺部分离出的上皮细胞。与亲本NCI-H69细胞系相比，H69AR细胞系对阿霉素的耐药性大约高出50倍。

单克隆抗体QCRL-1(ATCCHB-11765)和QCRL-3(ATCCHB-11766)将与固定的H69AR细胞发生反应。该细胞系对蒽环类类似物具有交叉耐药性，包括柔红霉素、表柔比星、美诺加利和米托蒽醌，以及阿西维星、依托泊苷、短杆菌肽D、秋水仙碱和长春花生物碱、长春新碱和长春花碱。这些细胞对博来霉素、5-氟尿嘧啶和卡铂几乎没有交叉耐药性，但对1-脱氢睾酮和利多卡因有轻微的敏感性。抗体与MRP（多药耐药蛋白）发生反应，MRP是一种190,000个整合膜磷酸糖蛋白，在某些药物选择性耐药细胞系中过度表达。

二、细胞特性

来源：55 岁白人男性，肺

形态：上皮细胞样，贴壁生长

含量：>1x10⁶cells

规格：T25瓶x1（常温运输）/含有1mL细胞悬液的冻存管x2（干冰运输）

用途：本产品仅供实验室研究使用，不可用于动物或人类治疗或诊断用途

三、培养条件及冻存液配制

1) 该细胞完全培养基为：RPMI-1640＋20%FBS＋1%P/S

2) 培养环境：气相：空气95%，二氧化碳5%；温度：37℃；培养箱湿度：70%-80%

3) 冻存液：90%FBS+10%DMSO，现用现配

四、收货注意事项

1) 收到细胞后，复苏活细胞请检查培养瓶的状况，若发现培养瓶破损、有液体溢出及细胞有污染，或者冻存细胞的干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落，请拍照后及时与我们联系。

2) 75%酒精消毒瓶壁，将T25瓶置于37℃培养箱静置约2-4h，在显微镜下确认细胞生长状态时，最好在低倍镜（4或5×物镜)下进行，能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10×和20×物镜下，同时给刚收到的细胞拍照，（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。

3) 贴壁生长的细胞处理：①静置后显微镜下观察细胞生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在运输过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。②若细胞密度未超过80%，可去除培养瓶中旧液（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中），加入新的完全培养基5mL，放入培养箱中继续培养（若培养瓶为密封瓶盖须拧松瓶盖）。③若细胞密度超过80%，请立即传代（若因运输振动脱落的细胞需要离心回收），首次传代，建议1:2传代（两个T25培养瓶）。

 

细胞培养操作说明

一、细胞复苏

将含有1mL细胞悬液的冻存管快速放入37℃水浴中解冻，轻轻摇晃加速溶解，直至冻存管中无结晶，用75%酒精擦拭冻存管外壁，将冻存管内容物加入到含有5mL完全培养基的离心管中混合均匀，1000rpm离心5min。弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀，接种于T25培养瓶中，放入培养箱中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

注意：在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和佩戴防护面罩，避免冻存管爆炸造成人员伤害。

二、细胞传代：细胞密度达80%～90%，即可进行传代

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加入0.25％胰酶于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化2-3min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后，加5mL以上含10%血清的完全培养基终止消化。

3. 轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出至离心管中，1000rpm离心5-8min，弃去上清液，补加1-2mL完全培养基后吹匀。

4. 按5-6mL/瓶补加完全培养基，将细胞悬液按1:2~1:3的比例分到新的含5-6mL完全培养基的培养皿中或者培养瓶中，放入培养箱中培养。

三、细胞冻存

收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。步骤如下：

1. 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/mL。

2. 1000rpm离心3-5min，去掉上清，用细胞冻存液重悬细胞，按每1mL冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/mL分配到一个冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

3. 将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，24h后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。

注意事项：

所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全柜内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。