双特异性磷酸酶5(DUSP5)等多因子检测试剂盒(流式荧光发

增强化学发光法(ECL)

灵敏度高些的考马斯亮蓝或者氨基黑。 11. 转印后的PVDF膜在含20%甲醇溶液中在白透射光照下不用染色也依稀可以看到透明的蛋白条带，有时这种快速的方法可以不用染色识别条带，避免染色膜影响后继实验。 转膜后的封闭注意： 12. 转膜后，膜上其他的空白位置需要用封闭液封闭。Western的灵敏度某种程度上受限于封闭做的好不好。脱脂奶是最常用的经济配方，用这种封闭剂由于里面可能有痕量的生物素和碱性磷酸酶，可能造成背景污染而不适合生物素-亲和素的检测方法，脱脂奶也不适合碱性磷酸酶检测（AP）方法

地高辛（DIG）产品选择指南——选择检测方法

检测方法 对于探针和靶序列杂交之后的检测，我们通常使用碱性磷酸酶（AP）耦联的抗体，采用显色法或化学发光法检测。在碱性磷酸酶的底物中，我们使用CDP-Star或CSPD用于化学发光法检测，NBT/BCIP用于显色法检测。同时，对于膜杂交中的化学发光信号的检测，建议使用Lumi-Film以获得最理想的信号。 检测底物 即用型CDP

操作篇：western blot 之发光鉴定

一般使用辣根过氧化物酶 HRP-ECL 发光法或碱性磷酸酶 AP-NBT/BICP 显色法。 1．HRP-ECL 发光法： 将 A、B 发光液按比例稀释混合。膜用去离子水稍加漂洗，滤纸贴角吸干，反贴法覆于 A、B 混合液滴上，熄灯至可见淡绿色荧光条带（5 min 左右）后滤纸贴角吸干，置于保鲜膜内固定于片盒中，迅速盖上胶片，关闭胶盒，根据所见荧光强度曝光。取出胶片立即完全浸入显影液中 1～2 min，清水漂洗一下后放在定影液中至底片完全定影，清水冲净晾干，标定