含杆状病毒IAP重复蛋白6(BIRC6)等多因子检测试剂盒(

【专题讨论】杆状病毒——昆虫细胞蛋白表达系统，影响蛋白表达的因素？

不知道有多少人成功用杆状病毒——昆虫细胞表达系统成功进行过蛋白表达？我最近表达一段病毒的非结构蛋白nsp-6，构建的重组Bacmid质粒经PCR鉴定正确，可是进行表达时，却未见蛋白表达，同时进行的试剂盒对照（含CAT基因的重组细胞中则有较好的表达。 我听说约有70%的蛋白在原核表达系统中是不表达的，但不知道这样的情况会不会发生在我用的昆虫细胞表达系统，除了实验操作失误方面的原因，还有什么因素是不使蛋白表达的，请大家讨论一下。 下面是我的实验过程，请高手指教，同时希望也给新手一个指导

蛋白免疫印迹（Western Blot）技术手册

使用可逆染色剂如丽春红S?检测转膜效果,检查转膜操作是否正确。PVDF?膜需预先浸在甲醇中，然后浸到转移缓冲液中。 洗膜过度 勿过度洗膜。 过度封闭使目标蛋白不能显色 使用0.5%奶粉或无奶粉代替5%奶粉的抗体稀释液，或更换封闭剂，减少封闭时间。 一抗失效 使用新鲜抗体，重复使用有效浓度会降低。 二抗受叠氮钠抑制 避免叠氮钠和HRP?标记抗体一起使用。 检测试剂盒过期

动物血中超氧化物歧化酶的提取和活性测定

为3：1，轻轻搅拌均匀，4 000r/min离心20min，收集红血球。 （2）除血红蛋白 红血球用3倍体积生理盐水洗涤，4 000r/min离心20min，重复三次，然后向洗净的红血球加入1～1.1倍体积去离子水，搅拌溶血30min，再向溶血液中分别缓慢加入0.25倍体积的预冷95%乙醇和0.15倍体积的预冷氯仿，剧烈搅拌15min左右，静置1h，然后4 000r/min离心20min除去变性血红蛋白沉淀，取清液，过滤，收集滤液（记录体积，测酶活性和蛋白浓度）。 （3）热变性