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96T
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文献和实验Annexin V是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸PS有高度亲和力,可通过细胞外侧暴露的PS与凋亡早期细胞胞膜结合,将Annexin V标记上荧光染料利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡。 由于凋亡晚期或坏死细胞膜完整性丧失,细胞核染色液可进入细胞内染色细胞核,搭配Annexin V使用可将处于不同凋亡时期的细胞区分开。 A.悬浮细胞: 按照实验方案进行凋亡诱导,300 g离心5 min,弃上清,收集细胞,用PBS洗涤细胞一次,轻轻重悬浮细胞并计数。 取1~5 ×
材料可用于标本制备来检测细菌、胆固醇和多种血浆、胆固醇和多种血浆分析物,也可用于临床自动化筛查细胞外病毒,如肝炎病毒和HIV等。图2 HEMASEP膜在全血制备病毒标本中的应用初步实验显示,HEMASEP V 血液分离介质可用于细胞外病毒的非离心制备方法。此概念很简单。血液分离材料与低蛋白质键结介质接触,使血浆迅速与全血分离(见图2)。然后血浆转移到另外的低蛋白质键结固体载体,并加入到聚合酶链式反应(PCR)工具以在平面区域中进行处理。实验中,感染有M13病毒的全血应用HEMASEP V介质
酶活性检测: A、取Ac-特异性多肽-pNA和2 ×反应液,溶解后冰浴备用。 B、 2 ×反应液工作液制备:每50 μL 2 ×反应液加入0.5 μL DTT。 C、吸取45 μL含100-200 μg蛋白的细胞或者组织裂解上清,如体积不足45 μL则用裂解液工作液补足至45 μL(各组采用相同的蛋白含量和体系进行测定和比较)。 D、按照下表设置反应体系: 注意: 1) 在设置反应体系时先加入反应工作液,再加入待测样本后适当混匀,注意避免产生气泡。 2) 最后加入Ac-特异性多肽-pNA
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