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文献和实验7.6,在应用前30min配制。 (3)ABC法的评价及实验注意事项 ABC法具有:①敏感性强:Hsu等应用ABC法与PAP法相比发现敏感性较PAP法高20~40倍能显示PAP法所不能显示的抗原。这是因为生物素与抗生物素间有较强的结合力,一个抗生物素分子具有可与生物素结合的4个活性部位,其中一部分可与生物素标记的过氧化物酶相结合,另一部分可与生物素标记的免疫球蛋白结合。生物素通过氨基与抗体或过氧化物酶分子相结合,一个过氧化物酶或免疫球蛋白分子可以结合多个生物素分子,从而增加了免疫球蛋白或过氧
实验原理 免疫电泳又称为γ球蛋白电泳或免疫球蛋白电泳技术,这是一种能够判断血液中三种免疫球蛋白IgM,IgG,IgA含量水平的实验方法。在这项实验技术中,首先利用蛋白质的分子量和所带电荷的比值运用水平琼脂糖凝胶电泳技术将蛋白质进行分离,然后将特异性的抗体引入到与电泳方向平行的凹槽中,在抗原和抗体的扩散过程中,抗原和抗体适当比例的结合会导致沉淀的产生。0.85%盐不仅可以终止扩散过程也可用于洗去未结合的蛋白,抗原和抗体结合所形成
液D/10=Fml。 f. PBS量D-(B+F)=Gml。注:A为蛋白含量,mg/ml;B为蛋白质溶液的容积;C为蛋白总量,mg;D为常数,mg;正为荧光素的量,mg;F为碳酸盐缓冲液的容积,ml;G为PBS的容积,ml。③结合(或标记) 边搅拌边将称取的荧光色素渐渐加入球蛋白溶液中,避免将荧光素粘于烧瓶壁(大约在5—10min内加完),加完后,继续避光搅拌12h左右。结合期间应保持蛋白溶液于4℃左右,故需将烧杯和搅拌器一起移人4℃冰箱中。④透析 结合完毕后,将标记的球蛋白溶液离心(2500
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