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文献和实验着两者都可,那就都能做。 3、石蜡切片的优点是可以保持组织细胞的形态结构,且容易存放在室温,而冰冻切片比较麻烦,一定要存在 -80ºC 的低温冰箱中,尤其是用来做原位杂交的切片,为了防止 RNA 降解,保存一贯很重要。由于石蜡切片可以切到 4 μm 左右,所以原位杂交探针容易渗透到组织中去,容易成功,而且得到的颜色/形态都较冰冻切片好。 二、一抗的选择要点和技巧是什么? 1、单克隆和多克隆抗体的选择。由一种克隆产生的特异性抗体叫做单克隆抗体。单克隆抗体能目标明确地与单一的特异抗原决定簇结合,就像导弹精确
81和清道夫受体类B型I(SR-BI)结合 [9,10],并通过与claudin-1和occludin相互作用,促进其与内质网膜融合,从而进入细胞 [11]。 随后,内质网介导的内化作用,内质网酸化促进低pH依赖的HCV包膜与内质网膜融合,导致病毒基因组RNA释放到细胞质中 [12]。RNA被用作复制和多聚蛋白翻译的模板。RNA翻译在ER中进行,并由5'UTR IRES与核糖体结合启动,导致形成多聚蛋白前体。 多聚蛋白在宿主或病毒蛋白酶的作用下共同翻译后和翻译后被切割,产生结构蛋白(核心蛋白、E1和E2
。 Western Blotting的protocol种类繁多,但大同小异,基本为上述几个步骤。要得到一个完美的实验结果,不仅需要优质的抗体,同时应对整个实验流程和体系进行严格的质量控制,才能最终达到你的实验目的。 影响免疫印迹成败的一个主要因素是抗原分子中可被抗体识别的表位性质。因为涉及到抗原样品的变性,只有那些识别耐变性表位的抗体可以与抗原结合。多数多克隆抗体中或多或少含有这种类型的抗体,所以在免疫印迹中常选用多克隆抗体。第二个影响因素是蛋白原液中抗原的浓度。一些表达量低的蛋白在免疫
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