信号序列受体α(SSRa)重组蛋白

甲醇酵母细胞表达系统

蛋白质在分泌到胞外之后获得准确的构型。毕赤酵母对外源蛋白自身的信号序列识别能力差，目前实验室较常用到的pPICZαA质粒，其信号肽来自酿酒酵母的α-交配因子（α-factor），能很好的达到以上的要求。并且作为新一代的毕赤酵母分泌表达质粒，它还拥有一个特点是其具有Zeocin抗性标记基因，给我们筛选转化子的工作带来很大的便利。 pPICZαA质粒是作为新一代的毕赤酵母分泌表达质粒，它的主要特点简介如下： （1）具有强效可调控启动子AOX1（alcohol oxidase，醇氧化酶）； （2）具有

毕赤酵母表达实验手册

与宿主染色体发生同源重组，将外源基因表达框架整合于染色体中以实现外源基因的表达［15］，包括启动子、外源基因克隆位点、终止序列、筛选标记等。表达载体都是穿梭质粒，先在大肠杆菌复制扩增，然后被导入宿主酵母细胞。为使产物分泌胞外，表达载体还需带有信号肽序列。 毕赤酵母表达系统有多种分泌型表达质粒，有许多蛋白在毕赤酵母得到了高效分泌表达。胞外表达需要在外源蛋白的N末端加上一段信号肽序列，引导重组蛋白进入分泌途径，可使蛋白蛋白质在分泌到胞外之后获得准确的构型。毕赤酵母对外源蛋白自身的信号序列识别能力

基因克隆的四大要素(Four Elements for Gene Cloning)

基端的受体菌，则适合用带lacZ△M15基因的质粒（如：pUC），以便实现β-D-半乳糖酶α互补，进行蓝白斑筛选。1．选择受体细胞的一般原则：①易于接纳外源DNA；②无特异的内源核酸内切酶；③载体复制、扩增不受阻；④与载体有互补性。根据不同的需求，还应考虑：①表达载体所含的选择性标记与受体细胞基因型是否匹配；②遗传稳定性高，易于进行扩大培养；③受体细胞内源蛋白水解酶基因确失或蛋白酶含量低，利于外源基因蛋白表达产物在细胞内积累；④可使外源基因高效分泌表达；⑤对动物细胞而言，所选用的受体细胞对培养的适应性强