脂肪细胞膜关联蛋白(APMAP)重组蛋白

转染实验大揭秘：转染到底是如何进行的

转染是将核酸导入真核细胞中的过程，是细胞生物学、基因表达和基因抑制实验中的关键步骤。转染是采用除病毒感染外的其他方法将核酸（DNA 或 RNA）人工导入细胞的过程。采用各种化学、生物学或物理方法导入外源性核酸会改变细胞的特性，从而实现细胞基因功能和蛋白质表达研究。 转染后，导入的核酸可以瞬时性地存在于细胞内，只表达一段时间且不会复制，也可以稳定地整合至受体基因组内，随着宿主基因组的复制而复制。 转染的目的 转染的两个主要目的是生成重组蛋白，或特异性地提升或抑制转染细胞中的基因表达。因此，转染

膜蛋白纯化攻略分享

电镜技术的发展，会有更多的膜蛋白结构得到解析，助力后续的功能研究和药物发现。 有了冷冻电镜这把利器之后，真正制约膜蛋白研究的其实是样品的制备。   常规的膜蛋白制备流程如下：  图 1. 常规的膜蛋白制备流程图   特点是： 蛋白含量低 收率低 活性易降低 纯化过程需要优化   去垢剂 天然表达的膜蛋白含量极低，很难纯化。就算是重组表达体系，生产出的膜蛋白通常具有细胞毒性，因此表达量也远低于常规重组蛋白。在整个纯化过程中都需要选择合适的去垢剂才能使膜蛋白本身保持空间构象和活性。 去垢剂可分为三种： 表

哺乳动物细胞表达的难点和解决方案，都帮你整理好了

先前已经提到 Strep-tag® 的历史，现在我们将着重介绍 Strep-tag® 在哺乳类细胞表达系统的应用。虽然大肠杆菌 E.coli 表达系统经济实惠，但由于缺乏重要的脂类，分子螫合物，以及重要的翻译后修饰，用它表达真核蛋白，可能会影响蛋白本身的折叠及功能，以膜蛋白为例，大肠杆菌表达系统能影响目标蛋白在细胞膜的插入位置、及其应有的功能[1]。除此之外，当目标蛋白大于 50kDa 时，使用大肠杆菌系统可能表达出不完整的蛋白[2]。所以，为了研究特定蛋白的功能（如：信号通路）、生产较大