解整合素金属蛋白酶5(ADAM5)重组蛋白

重组蛋白制备工艺优化策略

对宿主细胞具有毒性，从而选择抗毒性的表达系统；怎样选择表达系统，是大肠杆菌表达系统，酵母表达系统还是CHO细胞表达系统，不同的表达系统和培养方法显著影响下游的处理过程，目标蛋白表达的定位（胞内、细胞内膜、周质空间和胞外），蛋白表达的量都依赖于所选择的表达系统；蛋白的化学性质，是否容易被蛋白酶降解，是否会和一些金属离子，化学成分发生反应；蛋白的物理性质，是否对温度敏感等。从蛋白基因的获取，蛋白基因的克隆，蛋白的表达，做好一个整体的规划，将对纯化工作的方便快捷高效带来关键的影响。基因工程构建的纯化标记

蛋白复性（二）-基因重组蛋白质的体外复性

摘要 基因重组蛋白在大肠杆菌中表达时，由于表达量高，往往形成无生物活性的包涵体。包涵体必须经过变性和复性的过程才能获得有活性的重组蛋白。如何提高基因重组蛋白质的复性率，是生物工程技术的一个研究热点。对近年来的重组蛋白质的复性方法做一评述，为研究蛋白质折叠以及复性技术的进一步应用提供依据。 关键词 重组蛋白 包涵体 复性 二硫键 到目前为止，人们表达的重组蛋白质已有4000多种，其中用E.coli表达的蛋白质要占90%以上，尽管基因重组技术为大规模生产目标蛋白质提供

蛋白质结构与功能研究技术路线

。这就涉及到蛋白质结构域边界如何确定的问题。目前的主要方法是限制性酶解：比如将重组蛋白与 trypsin 孵育，取不同孵育时间的样品进行 SDS-PAGE 鉴定。一般来说，独立的结构域具有结构上的稳定性，能抵抗住蛋白酶酶解作用，这样我们从 SDS-PAGE 图上就可以观察到一条稳定条带，然后通过质谱、N 端测序等手段确定该片段的起始 - 终止位置。然后就以这个片段构建克隆，制备重组蛋白，进行后续的一系列实验。在完成蛋白质结构测定之后，就需要对蛋白质结构进行分析。通过结构，我们可以找到酶的活性位点、分子