葡萄糖苷酸酶β(GUSb)重组蛋白

过表达都是相似的，敲除的方法却很多

基因沉默的时效性和遗漏，尤其在多基因家族中的非特异性问题尚未得到解决。 目前RNAi 机制尚未完全阐明，因此需要更加深入的研究。 还有 ZFNs技术和TALEN技术 ZFNs（锌指核糖核酸酶）是由一个DNA识别域和一个非特异性核酸内切酶构成。DNA 识别域是由3-6个Cys2-His2锌指蛋白（zinc-fingers）串联组成，每个锌指蛋白识别并结合一个特异的三联体碱基，形成α-β-β二级结构。其中α螺旋的16氨基酸残基决定锌

在大肠杆菌中高效表达外源蛋白的策略

的表达系统会造成质粒的不稳定，细胞生长速度的下降和重组蛋白产量的降低[32，33]。Lanzer和Bujard曾对常用的lac启动子-操纵子系统进行了广泛的研究，证明操纵子放在启动子序列的不同位置会造成70倍差异的抑制。将17bp的操纵子置于-10和-35六聚体区之间所形成的抑制比将其放在-35区的上游或-10区的下游要高50-70倍[34]。 启动子的第三个特性是其简便和廉价的可诱导性。大量生产蛋白质最常用的启动子是热诱导（λPL）和化学诱导(trp)启动子。异丙基硫代-β-D-半乳糖

原核表达实验方法

一、原理 1、E .coli 表达系统 E .coli 是重要的原核表达体系。在重组基因转化入E .coli 菌株以后，通过温度的控制，诱导其在宿主菌内表达目的蛋白质，将表达样品进行SDS-PAGE 以检测表达蛋白质。 2、外源基因的诱导表达 提高外源基因表达水平的基本手段之一，就是将宿主菌的生长与外源基因的表达分成两个阶段，以减轻宿主菌的负荷。常用的有温度诱导和药物诱导。本实验采用异丙基硫代-β-D-半乳糖昔（IPTG）诱导外源基因表达。 不同