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文献和实验一、反应曲线 首先,我们了解一下化学反应的时间与吸光度一个曲线图,可以划分为四个区:延迟区、等速区、过渡区和平衡区,如下图所示: 二、反应原理 对于延迟区来讲,无规律可寻,对于指标检测没有意义。 等速区对应的指标检测方法是速率法。速率法又称连续监测法,是在测定酶活性或用酶法测定代谢产物时,连续选取时间-吸光度曲线中线性期内4个以上测光点作为读数点,并以单位时间吸光度变化值计算结果。线性期就是此期间内各测光点之间的吸光度差值相等,此线性期对酶促反应的底物来说属于零级反应。其测光点一般设置在加入
物在离心时就被分离出来。经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,复合物四组分又被分开。然后经Western blotting法,用抗体检测目的蛋白是什么,是否为预测蛋白。这种方法得到的目的蛋白是在细胞内天然与兴趣蛋白结合的,符合体内实际情况,得到的蛋白可信度高。但这种方法有两个缺陷:一是两种蛋白质的结合可能不是直接结合,而可能有第三者在中间起桥梁作用;二是必须在实验前预测目的蛋白是什么,以选择最后检测的抗体,所以,若预测不正确,实验就得不到结果,方法本身具有冒险性。七、pull-down技术 蛋白质相互作用
抗体再加二抗或标记的蛋白A。优点:简单、经济缺点:SDS-PAGE影响蛋白质构象,可能影响相互作用表面等离子共振(SPR)法原理:SPR法是生物科学、物理学和计算科学结合的方法,在玻璃表面镀上一层金薄膜,再把目标蛋白通过氨基共价偶联在金膜表面制成传感芯片。当一束偏振光照射到传感芯片的金膜时会引起金属中的电子共振,而导致反射光会在一定角度内大大减弱,其中反射光完全消失的角度称为共振角。共振角会随着金膜表面通过的液相的折射率的改变而改变,而折射率的改变又与结合在金膜表面的生物大分子的质量成正比,每结合
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