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- 文献和实验
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文献和实验对齐,用固定夹夹紧两块玻璃,并用玻璃胶带封边。 ⑵ 制胶:按照被分离DNA片段的大小、含量及玻璃板、衬条的大小决定凝胶的浓度与体积,一般来讲使用5%~8%的凝胶较为合适。轻轻摇匀配制的胶液于真空抽气(开始时要缓慢)除气泡,加 35μl TEMED至聚丙烯酰胺混合液中,混匀。用10ml玻璃吸管或50ml注射器吸取胶液,将玻璃模具倾斜成60O 角,缓慢注入两玻璃板间的空隙中,直至灌满模具顶部。立即插入相应的点样梳,(小心勿使梳齿下带进气泡,并且不要将梳齿全部插入胶内,留约2mm梳齿于玻璃板上端
化钠 20g 蛋白提取物 10g 酵母提取物 加入蒸馏水至1升,用NaOH调pH值至7.0,高压灭菌。 2 x LB-甘油(12.5%)(200ml) 175ml 2 x LB液体 25ml 甘油(100%) 加入蒸馏水至200ml,压灭菌,置于4℃备用。 二、步骤 1.将cDNA文库转入大肠杆菌,如DH5a(DH10B)后,取少量菌液涂布氨苄平板,以推算克隆总量。 2.取一大小合适的三角瓶,根据克隆总量配制2 x LB液体,每500ml 2 x LB液体可扩增5x
化镁和 0.1% 的吐温-20;或者 100 mmol/L Tris 氯化氢(25°C 时 pH 9.0 ),500 mmol/L 氯化钠,15 mmol/L 氯化镁和 1% 的 Triton X-100。 ( 4 ) 混合 dATP、dTTP、dGTP、dCTP 和 dUTP 的 dNTP 储液(10 mmol/L 或 100 mmol/L;不同厂家)。 ( 5 ) 灭菌去离子水。 ( 6 ) 10X Tris-硼酸-EDTA 缓冲液(TBE 缓冲液):包含 1 mol/L Tris、0.83
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