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文献和实验一、分级策略:从高效富集到至极纯化 1:级别一:切向流 提取处理:将293T上清原液过0.22μm滤膜后,使用300K中空纤维柱浓缩10倍,浓缩液过0.22μm滤膜后即为“切向流”级提取产品; 2:级别二:切向流+层析 提取处理: 将293T上清原液过0.22μm滤膜后,使用300K中空纤维柱浓缩10倍,浓缩液过0.22μm滤膜; 过膜后浓缩液过层析柱,收集外泌体馏分; 使用300K中空纤维柱将馏分浓缩10倍后过0.22μm滤膜,得到高纯“切向流+层析”级别的外泌体产品
5 ml 或 HiPrep 26/10 Desalting 53 ml 两种常用柱型。最终上样体积不要超过柱体积 30%。 分子筛 膜蛋白的纯化流程中,分子筛是理想化的最终步骤。不仅可以去除聚集体以及与目的蛋白大小不同的杂质,还可以进行缓冲液更换。这些因素往往能够决定后续的结构测定是否顺利。 推荐使用高分辨率分子筛大体积预装柱 Superdex 200 Increase 10/300 GL 和 Superose 6 Increase 10/300 GL。其最大上样量可达
老话说的好,巧妇难为无米之炊,要做好标签蛋白质的纯化实验,首先得选择合适的填料和预装柱,以达到事半功倍的效果。我们今天就来看看 Cytiva 标签蛋白填料的大家族,一起 pick 最适合您蛋白质研究的填料吧! 蛋白标签(Protein Tag) 所谓蛋白标签(Protein Tag)是指利用 DNA 体外重组技术,与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白,以便于目的蛋白的表达、检测、示踪、和纯化等。常用的标签有His、GST、Strep、MBP、Flag 和组合式的双标签。Cytiva 可为
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