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概述
TALON® Superflow™ 是一种基于钴离子的 IMAC 填料,具有高特异性,可替代带镍离子填料用于纯化带组氨酸标签的蛋白。
• High specificity – designed for histidine-tagged (his-tagged) purification of recombinant proteins when purity is more important than yield.
• Different selectivity compared to nickel-charged resins – an alternative to nickel affinity resins when a different metal ion is required.
用于 IMAC 层析的高特异性亲和填料
TALON Superflow 用于从原核或真核表达系统中纯化带组氨酸标签的蛋白。适用于在天然或变性条件下纯化,每毫升填料最多可结合 20 mg 带组氨酸标签的蛋白。该填料与常用的 IMAC 试剂兼容。
当镍不是最理想的金属离子时,有时需要使用钴离子 IMAC 填料纯化带组氨酸标签的蛋白。TALON Superflow 是高品质替代方案,可为亲和层析提供多种选择,与基于镍离子的填料相比,通常可提供纯度更高的蛋白。
成功用于已发表研究
这种组氨酸标签纯化填料可应用于以下方面:
• 纯化带 his 标签的抗体片段,用于研究巴西矛头蝮毒液的肌肉毒性
采用预填充规格,使用方便
TALON Superflow 填料有以下预填充规格可供选择:
• HiTrap TALON crude:HiTrap 层析柱规格,便于与注射器、蠕动泵或层析系统配合使用
• His SpinTrap TALON:离心柱,用于使用台式离心机进行小样本量筛选
• His GraviTrap TALON:重力流层析柱,用于简单纯化,无需使用设备
• His MultiTrap TALON 96 孔板:用于使用离心机或真空设备进行高通量筛选和小规模纯化
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文献和实验纯度有较高要求,Ni Sepharose High Performance(HP)是您的不二选择,它的粒径更小,可在保证回收率的同时帮助您获得更高的蛋白纯度。 2 样品杂质成分复杂 TALON Superflow 填料螯合有 Co2+, 对His标签蛋白的选择性高于传统的 Ni填料,可获得更高纯度的目标蛋白,减少非特异性杂带的影响。并且,90 μm 大的凝胶颗粒降低了填料对样品预处理的要求,可直接使用细胞裂解液进行柱层析实验。 3 样品含有 DTT 或者 EDTA 等添加剂 Ni
荧光蛋白-谷丙转氨酶)使用单一亲和层析和两步亲和层析的对比实验。HisTrap HP 纯化结果显示,填料对其它含有暴露的组氨酸残基的蛋白也具有亲和作用。GST 标签与 GSTrap 4B 上的谷胱甘肽配基特异性较高,可以产生较高纯度的蛋白。两个标签组合纯化可以得到最高纯度的蛋白。 双标签绿色荧光蛋白 结语 相比于单标签的一步亲和层析,双标签两步亲和层析可得到更高纯度蛋白。对于不同蛋白,您可以尝试在目的蛋白同侧或两侧,选择不同标签组合进行构建,以提高目的蛋白特异性甚至改善溶解性。 目前,Cytiva
。 绝招四:纯化实验中常用的亲和标签汇总 Cytiva 提供多种亲和标签纯化产品,可用于纯化 His、GST、Strep(II)/ Twin-Strep、MBP 这些标签融合的重组蛋白。不同的标签蛋白在分子量、促溶性、结合特异性等方面各有特点,个性鲜明。 图 2:Cytiva 产品可用于纯化的主要亲和标签的性质对比 绝招五:纯化得到的组分中没有或很少目的 His 标签蛋白的主要原因分析 若目的 His 标签蛋白正常表达(使用
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