通过SDS-PAGE分析蛋白质分子量

通过SDS-PAGE分析蛋白质分子量是研究蛋白质特性和功能的常用方法。SDS-PAGE是一种电泳技术，用于分离蛋白质分子。其核心原理是通过聚bǐngxīxiānàn凝胶在电场中分离蛋白质。SDS，即十二烷基硫酸钠，是一种阴离子去污剂，可使蛋白质在溶液中解链并赋予其一致的负电荷。通过这种方式，SDS-PAGE可根据蛋白质的分子量将其在凝胶中分离，较小的蛋白质分子会在凝胶中移动得更快，从而实现分子量的分离和比较。

 

SDS-PAGE因其高分辨率和相对简单的操作流程，被广泛应用于分子生物学和生物化学领域。其样品制备过程通常包括蛋白质提取、SDS处理和加热变性，使蛋白质完全展开并带有负电荷。随后，样品被加载到聚bǐngxīxiānàn凝胶中，通过施加电场进行分离。凝胶中的分离效果不仅与电场强度相关，还与聚bǐngxīxiānàn的浓度有关，这影响了凝胶的孔径大小，从而影响蛋白质的迁移速度。

 

通过SDS-PAGE分析蛋白质分子量的结果通常通过染色方法进行可视化，例如考马斯亮蓝染色或银染。染色使得蛋白质条带在凝胶中显现，从而可以使用标准分子量标记来估算样品的分子量。

 

常见问题：

 

Q1. 如何提高通过SDS-PAGE分析蛋白质分子量的分辨率？

 

A: 提高SDS-PAGE分辨率的一个关键方法是优化聚bǐngxīxiānàn凝胶的浓度。低分子量蛋白质通常需要较高浓度的凝胶以增强分辨率，而高分子量蛋白质则需要较低浓度的凝胶。此外，确保电泳缓冲液的pH值准确和电场的稳定性也是提高分辨率的重要因素。适当的样品制备、均匀加载以及使用高灵敏度的染色方法也能显著改善分辨率。

 

Q2. SDS-PAGE分析中，如何确保蛋白质的完全变性？

 

A: 确保蛋白质在SDS-PAGE中的完全变性需要适当的样品加热和SDS处理。首先，样品应在SDS存在的情况下加热至95°C持续几分钟，以破坏所有的二级和三级结构。其次，添加足够浓度的SDS来保证蛋白质带有一致的负电荷。此外，β-巯基乙醇或二硫苏糖醇（DTT）的添加可以还原二硫键，进一步确保完全变性。

 

Q3. 通过SDS-PAGE分析蛋白质分子量时，如何处理条带重叠的问题？

 

A: 条带重叠通常是由于样品过量或分辨率不足导致的。为解决此问题，可以减少样品加载量，或者通过使用更高浓度的分离胶来提高分辨率。此外，调整电泳时间和电压也可以帮助分离重叠的条带。如果重叠问题依然存在，可能需要重新优化样品制备条件或考虑使用其他分离技术。

 

百泰派克生物科技--生物制品表征，多组学生物质谱检测优质服务商

 

相关服务：

蛋白分子量测定

 

其他相关服务

 

 

特色项目

 

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

 

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

 

 

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

 

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

 

 

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

 

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

 

 

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

 

 

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

 

 

六、基因敲除

百泰派克生物科技（BTP）采用优化的CRISPR/Cas9系统为您提供高通量基因敲除服务，包括病毒包装、质粒制备、Cas9浓度测试等，为您解决选择哪个细胞进行敲除、可不可以敲除、如何敲除以及敲除效率如何等关键问题。可进行单/多基因敲除、移码突变和大序列敲除。我们的人全基因组基因敲除阵列Array文库覆盖了完整的人类全基因组，全基因组阵列敲除库已在人原代细胞全部完成高内涵筛选的验证，超过80%以上的靶点达到70%以上的敲除效率。

 

※服务优势：

1.样本适用性强

适用于人、小鼠的细胞系，原代细胞，免疫细胞及iPS细胞等。

2.基因必要性及表达量分析

在进行基因敲除实验前，我们会基于生物信息学和蛋白质组学数据对不同细胞中基因必要性及表达量进行分析，确保实验的可行性，降低实验风险。

3.gRNA无需从头设计和验证

我们完成了人类全基因组gRNA的全部验证，与药物相关的靶点也完成了PCR测序验证，无需针对客户的靶点设计预实验进行gRNA验证，大大缩短了项目周期。

4.高通量高效率

我们采用优化的CRISPR/Cas9系统进行高通量基因敲除，多个sgRNA/靶基因设计保证高敲除效率，超过80%靶点敲除效率在70%以上，短期内（10天内）即可提供高敲除效率的KO pool，满足绝大多数的应用场景。

5.敲除效率双验证

基因敲除后，我们采用WB实验中抗体KO验证的shǒuxuǎn方法——Sanger测序和深度蛋白质组学技术对敲除效率进行双验证，数据真实性的双重保障。

 

 

百泰派克生物科技七大检测平台

 

 

 

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

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