NobleRyder NR80089-1 裂解 EDTA

流式课堂 | 外周血抗凝剂，选 EDTA or 肝素？

众多。但肝素也有两个明显缺点： ● 肝素主要从猪牛羊等动物组织中分离得到，相比其他抗凝剂的成本更高； ● 肝素只能延缓凝血过程而不能阻止凝血。实际使用中发现，使用肝素钠作为抗凝剂的全血，在常温 10~12 小时，会逐渐出现凝血结块的现象。 3 EDTA or 肝素？ 由于两种抗凝剂会对血液产生不同的干扰，我们通常会根据实验目的来选择合适的抗凝剂。 a 若样本直接裂解红细胞，进行表面指标染色实验，则两种抗凝剂都可使用； b 因为肝素会对血小板产生影响，所有血小板相关实验不建议使用肝素

细胞裂解

的核酸；如果我们的目的是蛋白，那要根据蛋白的位置、特性等因素考虑裂解液，在提取蛋白后，再根据实验需要复性蛋白等。以下是细胞裂解中常用试剂和其作用：50 mM Tris-HCl pH 7.4（缓冲体系），150 mM NaCl（等渗体系），1 mM PMSF （强大的蛋白酶抑制剂），1 mM EDTA（变性剂和稳定剂），5 µg/ml Aprotinin（蛋白酶抑制剂），5 µg/ml Leupeptin（蛋白酶抑制剂），1% Triton x-100（破坏细胞），1% Sodium

碱裂解法提取质粒DNA的研究

的方法进行质粒DNA的提取，所用具体试剂见表1: ①挑取单菌落，接种于4. 0mlLB (含氨苄青霉素)液体培养基中， 37℃、250 rpm振荡培养过夜(约12～14h) 。②取1. 5ml培养物加入Eppendorf管中，室温12000g离心1min，弃上清。③将细菌沉淀重悬于100μl预冷的溶液Ⅰ中，剧烈振荡，使菌体分散混匀。④加200μl新鲜配制的溶液Ⅱ，颠倒数次混匀(不要剧烈振荡) ，并将离心管放置于冰上2min。⑤加入150μl预冷的溶液Ⅲ，将管温和颠倒数次混匀冰上放置3min。⑥加入