NobleRyder NR80083-S1 裂解 EDT

Western Blot(免疫印迹法)步骤

,500- 1000μl/瓶) ，刮落细胞，转移到Ep管。注意：冰上操作。 4.超声 10~15秒剪切DNA以减低样品粘性。 5.煮沸样品5 minutes。 6.离心12000g，5 min，取上清。 7.电泳分离：上样15μl~20μl 至 SDS-PAGE 胶 (10 cm x 10 cm)电泳。 如要定量检测某蛋白的表达水平， 应用RIPA裂解液(1 ml per 107 cells/100 mm dish/150cm2 flask)裂解

质粒DNA的大量制备

/分离心15分钟，弃上清，敞开离心管口并倒置离心管使上清全部流尽。    2) 将细菌沉淀重悬于100ml用冰预冷的STE中。按步骤1)所述方法离心，以收集细菌细胞。 2. 碱裂解法    1) 将冼过的500ml 培养物的细菌沉淀物重悬于10ml溶液Ｉ中。    2) 加1ml新配制的溶菌酶溶液。当溶液的pH值低于8.0时，溶菌酶不能有效工作。    3) 加20ml新配制的溶液Ⅱ。盖紧瓶盖，缓缓颠倒离心瓶数次，以充分混匀内容物。于室温放置5-10

【资源】Western-Blot操作流程

（0.87ml裂解液加入1.74mg/ml PMSF50μl）。 （一般实际用的比较多的其实是RIPA裂解配方：50 mM Tris-HCl pH 7.4、150 mM NaCl、1 mM PMSF、1 mM EDTA、1% Triton x-100、1%脱氧胆酸钠、0.1% SDS。至于其中每个要加多少量那就自己去算吧，因为本人已经算好的配方表无意间弄丢了） 0.01mol/L PBS（ pH 7.2-7.4） 0.2 mol/L NaH2PO 19ml 0.2 mol/L Na HPO4 81