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　　Sciencell，sciencell厂家，sciencell原代细胞，sciencell原代细胞厂家

　　吉奥蓝图是一家专注于生物医药的科研产品研究、开发、生产和销售的高科技企业。
　　公司自成立以来便一直秉承“精品、专业、诚信、便捷”的宗旨和理念，不断的开拓进取，务实创新，收录与典藏了近千种各类细胞株/系，公司细胞主要来源ATCC,ECACC,ScienCell, DSMZ, RIKEN 等，以及少数国内外科研机构建系。
　　其中自主研发建系各类示踪细胞、耐药株细胞、基因敲除细胞等百余种，客户遍及全国各地的医院、高校、药厂、科研机构等，产品质量与技术支持/服务体系深受广大客户信任和青眯。
　　目前公司以细胞生物学产品为主体，陆续建立与开发了：细胞STR检测试剂盒、PDX人源肿瘤细胞异体移植技术、荷瘤动物/特殊疾病动物模型、原代细胞系构建、耐药株筛选、Cas9基因敲除株、示踪细胞筛选等新产品和技术体系，以期为广大客户提供更多更好的科研产品和服务。
　　诚为基质为本协为赢，吉奥蓝图期待与您的合作……

　　原代细胞的培养和维持
　　一、原代细胞的培养与维持
　　1、静置贴壁细胞（包括半贴壁细胞的培养）
　　凡经消化液处理实体组织来源的细胞要通过充分漂洗，以尽量除去消化液的毒性，细胞接种时浓度要稍大一些，至少为5×108细胞/L,培养基可用Eagle（MEM）或DNEM培养，小牛血清浓度为10%~80%。在起始的2天中尽量减少振荡，以防止刚贴壁的细胞发生脱落，漂浮。
　　贴壁细胞长成网状或基本单层时，由于营养缺乏，代谢产物增多，pH变酸，不适宜细胞生长，此时细胞还未长成单层，未达到饱和密度，仍需继续培养，因此，需采取换液方式来更新营养成分以满足细胞继续生长繁殖的需要。其换液方法比较简单，即弃去旧液，加入与原培养液相同的等量完全培养基。
　　2、悬浮细胞的培养
　　凡来自外周血、胸腹水、脾脏、淋巴结、骨髓的淋巴细胞、造血干细胞以及白血病细胞，在原代培养时要尽量去除红细胞。若要将淋巴细胞及白血病细胞进行长期培养，淋巴细胞中要加入生长因子，白血病细胞中要加入少量的原患者血清，以利细胞生长，待细胞开始增殖甚至结成小团块，培养基中pH变酸，说明细胞生长繁殖良好，一般每隔3天需半量换液一次（换液时尽量使细胞不丢失），待细胞增殖加快，浓度明显增加，pH发生明显变化时，此时可考虑传代。
　　悬浮细胞在未达到饱和密度时，但培养基中的营养成分并不能维持细胞的营养需求时，只能采用半量换液的方式。
　　二、原代细胞培养的首次传代 （Subculture）
　　这种使原代细胞经分散接种的过程称之为传代。每进行一次分离再培养称之为传一代，传至5~10代以内的细胞通常称为次代培养细胞，传至10~20代以上的细胞，通常确定为传代细胞（或称传代细胞系）。传代细胞系的建立，关键是初代培养的首次传代。应注意如下几点：
　　（1）细胞生长密度不高时，或未能达到覆盖整个瓶底时不能急于传代。
　　（2）原代培养的贴壁细胞多为混杂细胞，形态各异，往往是上皮样细胞和成纤维样细胞并存，采用胰蛋白酶消化时要掌握好消化时间，因成纤维细胞易于脱壁，上皮细胞不易脱壁，因此，可根据需要选用适当的消化时间及时中止消化。在早先传代时，其消化时间比一般已建系的细胞相对长一些。
　　（3）吹打已消化的细胞要轻巧，既不能听到有明显的吹打声，又不能有大量泡沫在悬液中形成，以尽可能减少对细胞的机械损伤。
　　（4）首次传代时细胞接种数量要多一些，以利于细胞的生存和繁殖。如果消化分离的细胞悬液有组织块，也一并传入到培养瓶，尽量减少细胞损失。
　　（5）首次传代培养时的pH不能高，宁可偏低一些。此外，小牛血清浓度可适当加大至15%~20%左右。

细胞常规说明：
培养条件：89%基础培养基+10%FBS+1%双抗
冻存液成分：10%DMSO+40%FBS+50%基础培养液
细胞质检情况：不含细菌、真菌、支原体等微生物污染
传代建议：1:2~1:3传代，2~3天换液1次
特别提醒：签收细胞后，如细胞状态不佳，或培养中遇到问题，烦请当天尽快联系，以便处理。当天及时反馈细胞情况和细胞照片是售后跟踪处理重要的参考依据，请务必重视。
 
悬浮细胞接收后的操作流程与注意事项
1.如签收时出现培养瓶壁破裂，漏液等情况请及时做好照片记录并联系实验室 
2.拧松瓶盖，细胞瓶竖立培养8h（或过夜）
3.待细胞沉底后吸除上层液体（含碎片残渣，请小心操作），然后吸取沉底的细胞层（2ML左右转移到新的培养瓶，加入新鲜的完全培养基（如细胞状态较差可将血清浓度调高到15%）继续培养
 
悬浮细胞常规培养传代流程（请严格遵照无菌操作）
1.将培养瓶/皿中的细胞重悬混匀
2.吸取2/3或者一半混匀后的细胞悬液到新的培养瓶/皿
3.分别在原瓶/皿和新分瓶的培养瓶/皿加入等量或者2倍的新鲜培养基，使细胞密度保持在5 X10(5) /ml左右
4.注意培养基PH值变化情况和细胞密度，定期半量换液（每周2-3次），待细胞密度大于2 X 10(6) /ml以后重复1项操作或者冻存

贴壁细胞接收后的操作流程与注意事项
1.收到细胞当天尽快更换新鲜完全培养基，第二天再进行消化处理
2.如果细胞收到时呈悬浮或者部分悬浮的状态，请将悬浮的细胞即时离心，加15%血清的完全培养基到新的培养皿/瓶继续培养观察。同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的完全培养基，培养观察
3.若出现生长不均：贴壁细胞若出现分布不均，成岛状生长，可将细胞进行消化，重悬打散细胞，加入新鲜培养基进行培养

贴壁细胞常规培养传代流程（请严格遵照无菌操作）
1.吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加适量0.25%胰酶进行消化细胞（注意把握消化时间）
2.镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时（不建议消化到细胞漂浮）去掉胰酶，加6~8ml 完全培养基，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落，吹散
3.取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的完全培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养
4.注意培养基PH值变化情况，定期换液（每周2-3次），待细胞密度达到80%以后重复113项作或者冻存