NobleRyder NR224460 酪胨-卵磷脂-吐

植物体内硝酸还原酶活力的测定(活体法)

【原理】硝酸还原酶（NR）是植物氮素同化的关键酶，它催化植物体内的硝酸盐还原为亚硝酸盐： 产生的亚硝酸盐与对–氨基苯磺酸（或对–氨基苯磺酰胺）及α–萘胺（或萘基乙烯二胺）在酸性条件下定量生成红色偶氮化合物。其反应如下：生成的红色偶氮化合物在540nm波长下有最大吸收峰，可用分光光度法测定。硝酸还原酶活性可由产生的亚硝态氮的量表示。一般以Nμg·g﹣1·h﹣1为单位。NR的测定可分为活体法和离体法。活体法步骤简单，适合快速、多组测定。离体法复杂，但重复性较好。【仪器与用具】分光光度计；真空抽气

引物设计实例分析(多图)

-60度， 尽可能保证上下游引物的Tm值一致，一般不超过2度。 如果引物中的G+C含量相对偏低，则可以使引物长度稍长，而保证一定的退火温度。Tm=2（A+T）+4（C+G）4. 引物的GC含量有效引物中（G+C）的比例为40-60%,过高或过低都不利于引发反应。上下游引物的GC含量不能相差太大。5. 引物自身引物间3‘端的互补、二聚体或发夹结构也可能导致PCR反应失败任务用绿色荧光蛋白（GFP）标记蛋白NR1 引物要求 PCR扩增GFP GFP两边添加BamHI酶切位点 保证NR1的阅读

Protocol for competitive RT-PCR

that containes a T7 RNA promoter sequence. The in vitro transcription of the cloned fragments is performed using T7 RNA polymerase (e.g. Gibco BRL). The internal standard RNA is then treated with RNase-free DNase I (e.g. Gibco BRL) to remove the plasmid DNA