小鼠Igγ1链C区(IGHG1)ELISA试剂盒

【分享】ELISA原理

性也不同。IgG和IgM的重链分别称为γ（gamma）链和μ（mu）链。① 木瓜酶裂解部位 ② 胃蛋白酶裂解部位重链和轻链的N端的氨基酸排列顺序因各种抗体而异，称为可变区，分别用VH和VL表示。两者构成抗体的抗原结合部位，只与相应的抗原决定簇匹配，发生特异性结合，是抗体专一性结合抗原的结构基础。IgG可被木瓜蛋白酶分解为三个区段，其中两个相同的区段称抗原结合片段（Fab）。每个Fab都保存结合抗原的能力，但只有一个抗原结合位点，是单价的，与抗原结合后不出现凝集或沉淀。另一区段称Fc段，无抗体

嵌合基因的构建（RT-PCR方法扩增VL、VH基因）

的另外一些附加元件包括增强子，以及带有剪接供体和剪接受体功能位点的内含子。 【操作步骤】 （1）设计数对简并PCR引物：VH和VL5’端引物与V区的前导序列互补，VH3’端引物与IgG(IgM)CH1 5’端及所有V区J段3’端互补，VL3’端引物与k（l）链CL5’端和V区的所有J段3’端互补，引物的简并性基本上不会造成PCR产物与原来基因序列上氨基酸的变异。下述引物可扩增出大多数单抗的基因。 1）小鼠VH5’端引物（引入SalⅠ酶切位点） VH5’1-GGGGTCGAC

目的基因片段的PCR扩增与克隆

引物的序列应位于基因组DNA的高度保守区，且与非扩增区无同源序列。这样可以减少引物与基因组的非特异性结合，提高反应的特异性 ②引物长度：15－40bp为宜。引物过短或过长均可使反应的特异性下降。 ③引物的碱基尽可能随机发布，避免出现数个嘌呤或嘧啶的连续排列，G+C碱基的含量在40%－75%之间。 ④引物内部应避免形成二级结构，特别是引物的末端应避免有回文结构。 ⑤二个引物不应有互补序列，特别是3’端应避免互补，以免形成“引物二聚体”，浪费引物。 ⑥引物5’末端碱基无严格限制，在与模板