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产品货号:M0500
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产品简介:
使用膜再生液可以对同一张膜进行多次Western Blot 检测。在室温条件下,将用过的膜浸泡在膜再生液10-60分钟,可在不影响抗原蛋白的情况下清除膜上结合的抗体。随后,可以使用不同的抗体进行下一轮Western Blot 实验。适宜从少量样品多次检测不同蛋白质。即使样品量并不匮乏,采用这一策略多次检测同一张膜上的蛋白,能省去给药处理、蛋白电泳和膜转移等耗费性步骤。而且可以消除重新上样而带来的误差,使可比性更强。
Western Blot 膜再生液特点:
无毒无味无害,室温下使用;可对同一张膜进行5 次以上的Western Blot 检测。
适用:清除硝酸纤维素膜或PVDF 膜上结合的抗体,不影响抗原蛋白。
使用方法:
1、将膜充分浸泡于适当体积的再生液中,室温洗脱10-20分钟,具体时间长短应该根据抗体特性进行优化,洗脱某些抗体需较长时间,更有长达60分钟之久。
2、取出膜,用洗涤液(TBST等)漂洗两三次。
3、此时膜上抗体已除去,可重新封闭后再加入另一种抗体进行检测。
注意事项:
1. 膜再生液实质是在不影响膜上结合的抗原的条件下将抗体洗脱下来,实际操作中,膜类型、抗体类型、浓度及抗原特性都影响洗脱难易度。
2. 适用于 ECL 和类似的化学发光试剂进行的 Western 检测。不适用于非化学发光试剂进行的 Western检测,例如DAB,NBT/BCIP。
3. 用ECL 显色后,再生液洗脱几分钟后,可再次加入ECL 显色液显影,如胶片上显示条带,表明抗体未除净,须进一步在再生液中浸泡,至胶片上无显色。
4. 使用脱脂奶粉封闭的膜要比使用BSA 封闭的膜更容易再生。
5. 尽量避免让膜干燥。
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文献和实验.00SDS10%,100ml100.00洗脱抗体缓冲液(膜再生液)100ml100.00二抗-HRP0.2mg175.00预染Marker(20~120kDa)250ul200.00ECL化学发光试剂25ml200.00显影液250ml45.00定影液250ml45.00硝酸纤维素膜NC膜15cm*20cm60.00PVDF膜13.5cm*15cm80.003MM滤纸27cm*1M40.00X线暗盒5*7int.600.00柯达X光胶片5*7int. 100/pk200.00乳胶手套100/pk
底物孵育 恰当的发光或显色底物 曝光 曝光时间掌控,X-光片,显影定影试剂 后Western Blot选择 抗体剥离缓冲液(蛋白印迹膜再生液),底片北京去除剂
如此的方法,即:将原先结合上的磷酸化抗体及二抗洗去(strip)。1)Strip Solution(Stripping Buffer,膜再生液)如下:常温密闭保存(有臭鸡蛋味道),能放很久,几个月不成问题。2)Strip方法准备一硬塑料盒,倒入strip solution,将膜完全浸泡(或者将膜与strip buffer封入塑料薄膜中,完全浸入水浴锅中,使四周都能接触恒温水),50度水浴30min,用TBST洗5分钟,3次即可去除已孵育结合的抗体。信号会均匀地减弱些许,但不会造成差异。许多人会建议55度
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