- ￥14
- 禾午生物
- P50698
- 国产
- 2025年07月14日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
99
- 英文名：
pLV3-U6-MCS-shRNA-mCherry-Hyg
- 保质期：
3个月~12个月
- 供应商：
上海禾午生物有限公司
- 保存条件：
负20℃&负80℃
- 规格：
干粉&甘油菌
| 名称 | pLV3-U6-MCS-shRNA-mCherry-Hyg |
| 质粒宿主 | 哺乳细胞,慢病毒 |
| 质粒用途 | 干扰沉默 |
| 片段类型 | shRNA |
| 原核抗性 | Amp |
| 筛选标记 | Hyg |
| 荧光标记 | 红色 |
| 启动子 | U6 |
| 复制子 | pUC |
| 感受态 | Stbl3 |
| 温度 | 37度 |
| 正向引物 | U6-F(发夹结构)：GAGGGCCTATTTCCCATGA |
| pLV3-U6-MCS-shRNA-mCherry-Hyg |
| pCMV-TFPI2(human)-3×FLAG-Neo |
| pCMV-LUM(human)-3×FLAG-Neo |
| pCMV-VPS37C(human)-3×FLAG-Neo |
| pCMV-NRP1(human)-3×FLAG-10×His-Neo |
| pCMV-EGFP-RHOG(human)-Neo |
| pCMV-3×FLAG-Nat10(mouse)-Neo |
| pCMV-mCherry-E2F8(human)-3×FLAG-Neo |
| pLVX-TetOne-TRE3GS-MCS-EF1a-Neo |
| pLV3-CMV-CACNA1C(human)-3×FLAG-Puro |
| pCMV-SIGLEC8(human)-3×FLAG-Neo |
| pCMV-PROCR(human)-3×FLAG-Neo |
| pCMV-KREMEN1(human)-3×FLAG-Neo |
| pCMV-SOSTDC1(human)-3×FLAG-Neo |
| pCMV-REN(human)-3×FLAG-Neo |
| pCMV-VASN(human)-3×FLAG-Neo |
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文献和实验AAV 三保一是什么？shRNA 体内敲低一次保一条有效靶点
靶点对比 设计要点 做法 为什么 多靶点并行 单基因设计 3 条独立 shRNA 覆盖单靶点的随机失效 区域分散 分别靶向 CDS / 3'UTR 等不同区段 避免 mRNA 折叠致全部失效 GC 适中 推荐 35%–55% 范围 平衡稳定性与特异性、优化加工 脱靶低 避开基因组同源区域 保证干扰特异性 载体适配 U6 Pol Ⅲ 驱动，经典 GV478 载体（U6-MCS-CAG-EGFP） 高效转录、被 Dicer 加工 判定标准 RT-qPCR ΔCt
该载体在大肠杆菌中的复制。 U6启动子是确保目的shRNA转录，个人觉得转染的shRNA表达载体应该具有真核复制起点吧？！ 网上搜到一种RNAi载体pGO包含的序列：pUC复制起点pUCori、fl复制起点flori、细菌启动子P、卡那霉素基因Kan、HSV-TKPolyA、U6启动子U6promoter 和多克隆位点MCS，其特征在于还含有用于表达绿色荧光蛋白基因的转录元件，包括CMV启动子CMVpromoter、增强绿色荧光蛋白基因EGFP和 SV40PolyA
基因功能研究实验设计流程怎么走？从目的基因到验证的全链路拆解
（CRISPR）适合要彻底否定该基因功能、或者做稳转细胞株。顺带一句，干扰和敲除都建议配回复实验（rescue）：把靶点处做同义突变后再过表达，如果表型回来了，才坐实是靶点有效；或者干脆用两个独立有效靶点同时做，两个都出同一表型，基本能排除脱靶。 步骤 3 的载体与元件选择 载体不是随便选个空的就填基因。启动子决定了在哪表达：U6 是 III 型启动子，只驱动 shRNA 这种小 RNA，不能驱动蛋白编码基因；CMV/CAG 是广谱的 Pol II 启动子，适合过表达；hSyn、CaMKIIα、GFAP
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