StarLighter dsDNA 高灵敏检测试剂盒V2

StarLighter dsDNA 高灵敏检测试剂盒

StarLighter dsDNA HS Assay Kit

For use with Qubits Fluorometer(all models) or icroplate Reader

产品简介:
Starlighter dsDNAHS (High sensitivity) Assay Kit是一种简便快速、灵敏、准确度高的双链DNA (dSDNA)荧光定量检测试剂盒。本试剂盒包含荧光检测试剂、标准品和缓冲液，对dSDNA有高度选择性，RNA干扰小，对于dsDNA样本在0.1-100ng之间有良好的线性，相比于传统的紫外检测(A260)方法，可更精确的对DNA进行定量，免除其它物质的干扰，如RNA、蛋白等，提高实验的准确性。本试剂盒操作简单，可使用荧光酶标仪或Qubitt 荧光定量仪进行检测。

产品优势:
灵敏度高:可以对浓度为100pg/uL-100ngmL的dsDNA样品进行精确定量:特异性强:只结合dSDNA，特异性强，不受RNA的影响，并且对一些常规的污染物，如盐、游离的核苷酸、蛋白质、溶剂、去污剂等都具有极好的耐受性。耐受性好:耐受较高浓度的盐、尿素、乙醇、去垢剂、蛋白或琼脂糖，可以直接定量PCR 扩增产物而无器从反应混合物中纯化DNA.操作简便性:操作简单，将荧光检测试剂用缓冲液稀释成工作液，然后加入待测dsDNA样品，通过Qubit荧光仪进行检测，此操作在室温下即可进行定量更精确:在SSDNA、RNA和单体核苷酸存在的条件下，可以选择性地检测低至100pg'uL 的dSDNA.

实验步骤:
1、使用荧光酶标仪进行双链DNA定量检测分析
1.1使用前，将试剂盒中的各组分放至室温。检查QB组分是否有沉淀，若有沉淀物，可将该试剂置于37℃C水浴锅中温育，并轻柔混匀直到沉淀物完全溶解。使用前各组分均需混匀。
1.2制备检测工作液。取试剂盒中的荧光试剂OF，按照1:199的比例用缓冲液OB进行稀释，配制成检测工作液，现用现配。(例如检测5个DNA样品，同时要5个标准品，可由标准品S1系列稀释，浓度范围0ng/uL-10ng/ul)，因此需要配制10个样品的工作液:10 μL的OF+1990UL的OB缓冲液，涡旋混匀，制成检测工作液。

1.3 向96孔酶标板中加入新鲜配制的检测工作液，标准品孔加入190uL工作液，DNA样本孔可添加180-199 uL的工作液。
注意:推荐使用黑色的酶标板，可有效降低反应孔之间的荧光信号干扰1.4 取试剂盒中的DNA标准品OS1,按浓度梯度进行稀释，制成一系列稀释的dsDNA标准品(浓度范围在0 ng/uL-10 ng /uL)。
1.5 向96 孔酶标板中加入梯度浓度的dSDNA标准品以及待测的dSDNA样品，用移液器轻轻地吹打或震荡混匀。

1.6将酶标板置于室温环境下避光孵育2分钟。使用荧光酶标仪检测荧光信号值，选择合适的检测波段:激发波长(Ex)设置485mmm，发射波长(Emm)设置为530nm。

1.7测得的dSDNA标准品的荧光信号值分别对应其浓度，绘制标准曲线;将测得的未知浓度 dSDNA样品的荧光信号值代入标准曲线中，可计算出dsDNA样品的浓度

2、使用Qubit荧光仪进行双链DNA定量检测分析

2.1在使用前，将试剂盒中的各组份放至室温。检查OB组份是否有沉淀，若有沉淀物，可将该试剂置于 37C水浴锅中温育，并轻菜混匀直到沉淀物完全溶解。使用前将每个试剂都混匀。
2.2制备检测工作液。取试剂盒中的荧光试剂QE 按照1:199的比例用缓冲液OB进行稀释配制成检测工作液，现配现用。(例如检测8个DNA样品，以及2个标准品，因此需要配制10个样品的工作液(10uL的QF+1990 uL的QB缓冲液，涡旋混匀，制成检测工作液)。

2.3 向分析管中分别加入新鲜配制的检测工作液(180-199 μL,根据加入的样本量而定总体积200 L)，标准品每孔加190L新鲜配制的工作液。

2.4 向分析管中分别加入10MLDNA标准品OS0和DNA标准品OS1，以及加入一定体积(1-20μL)的待测dsDNA样本，使管中总体积达到200μL,涡旋震荡2-3秒使溶液充分混匀。标记dsDNA标准品和待测样品的分析管。
2.5 将分析管置于室温环境下避光静置孵育2分钟

2.6 按照Qubit"荧光仪的操作说明，选择 dsDNA High Sensitivity 检测程序测定荧光信号值。