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- 上海莼试
- CS-01Y74977
- 国产
- 2025年07月11日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
56
- 英文名：
PF-06305591P
- CAS号：
1449473-97-5
- 供应商：
上海莼试
- 保存条件：
Store at -20°C
- 规格：
5mg
| 产品名称 | PF-06305591P | 产品货号 | CS-01Y74977 |
| 规格 | 5mg | CAS号 | 1449473-97-5 |
| 含量 | >98.00% | 分子式 | C15H22N4O |
| 分子量 | 466.62 | 用途 | 仅供科研研究使用 |
PF-06305591P规格：5mg
CAS：1449473-97-5
别名：N/A
化学名：N/A
分子式：C15H22N4O
分子量：466.62
溶解度：Soluble in DMSO
储存条件：Store at -20°C
General tips：For obtaining a higher solubility , please warm the tube at 37 ℃ and shake it in the ultrasonic bath for a while.
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产品描述:
PF-06305591 is a potent and highly selective voltage gated sodium channel NaV1.8 blocker, with an IC50 of 15 nM. An excellent preclinical in vitro ADME and safety profile[1].PF-06305591 (compound 9) has a highly attractive profile with respect to NaV selectivity, hERG activity, passive permeability and in vitro metabolic stability[1].PF-06305591 (compound 9) has good rat bioavailability. PF-06305591 offers the possibility of investigating higher IC50 multiples of Nav1.8 blockade in the clinic, and therefore a more thorough evaluation of the role of NaV1.8 in the treatment of pain[1].[1]. Brown AD, et al. The discovery and optimization of benzimidazoles as selective NaV1.8 blockers for the treatment of pain. Bioorg Med Chem. 2019 Jan 1;27(1):230-239.
使用方法:
1. 常用筛选浓度
注意：用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve)，即剂量反应性曲线，来确定最佳筛选浓度。
一般而言，哺乳动物细胞50-500μg/mL;细菌/植物细胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 杀灭曲线的建立
注意：为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素浓度，可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现，至少选择5个浓度。
1) 第一天：未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2培养过夜;注：对于需要更高密度来检测活力的细胞，可增加接种量。
2) 根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml，然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。
3) 第二天：替换旧的培养基，换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。
4) 接下来每3-4天更换新的含药物培养基。
5) 按照固定的周期(如每2天)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数(通常是7-10天)内能够杀死绝大多数细胞的浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。
3. 稳定转染细胞的筛选
1) 转染48h后，用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞(直接传代或者稀释后传代)。
注意：细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤。则当细胞过于稠密，其效率会降低。为了得到较好的筛选效果，最好将细胞稀释至丰度不超过25%
2) 每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。
3) 筛选7天后观察并评估细胞克隆(集落)的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间，这取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果。
4) 挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
5) 之后更换正常培养基培养即可。
公司正在出售的产品:
| Recombnant Human Capae 1 proten | Centrin 1 Antibody Blocking Peptide |
| Recombinant Human DRAK2 | Recombinant Human SLC31A1 |
| PTGR2 Antibody Blocking Peptide | Recombinant Human CXCL14 |
| SMPD1 Antibody Blocking Peptide | Recombinant Human TOLLIP |
| Recombinant mouse GUK1 protein, His | Recombinant Human GJB1 |
| THBD Antibody Blocking Peptide | Recombinant Human UBE2D3 |
| Kinesin 5C/NKHC2 Antibody Blocking Peptide | Recombinant Human KRT20 |
| Phospho-Paxillin (Tyr88) Antibody Blocking Peptide | 细胞角蛋白39封闭多肽 |
| ANKS1B/AIDA1 Antibody Blocking Peptide | Recombinant Human PDE6A |
| Phospho-CEBPA (Thr222/226) Antibody Blocking Peptide | Recombinant Human TTC33 |
| C3orf21 Antibody Blocking Peptide | Recombinant Human HER2 |
| Phospho-HDAC4 (Ser246)/HDAC5(Ser259)/HDAC7(Ser155) Antibody Blocking Peptide | Recombinant Human MPC2 |
| phospho-AR (Ser213) Antibody Blocking Peptide | PF-06305591PRecombinant Human THAP1 |
| DLGAP4 Antibody Blocking Peptide | Recombinant Mouse LECT2 |
| DTNB Antibody Blocking Peptide | Recombinant Human FGFR3 |
蛋白酶抑制剂混合物实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::yi戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的yi戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::yi戊醇(25:24:1)抽提两次,:yi戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
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文献和实验Nat Commun：结直肠癌致癌突变 RNF43_pG659fs 对 PI3K/mTOR 抑制剂敏感
信号的促癌作用。 为了解 RNF43_p.G659fs 的下游通路及潜在的药物靶点，该研究通过药物筛选文库（超过 5000 种化合药物，包括了 FDA 批准和临床前试验药物）有意思地发现 RNF43_p.G659fs 突变的细胞对 PI3K/mTOR 抑制剂（阿培利司 Alpelisib 和 PF-04691502）的敏感性比野生型的细胞强，并在肿瘤类器官和小鼠移植瘤实验中得到验证。 进一步通过蛋白质谱分析 p.G659fs 突变和野生型的差异互作蛋白，在非变性条件下进行免疫沉淀，用 TMT
8.0) 、5 mmol/L MgCl2、蛋白酶混合抑制剂（表 6-1)。 ( 4 ) 100% PF-Percoll：0.8 g PEG 8000、0.27 g Ficoll 400000，加 Percoll 至最终体积为 27.5 ml。 ( 5 ) Percoll 梯度：PF Percoll ( 40% 或 85% ) 、0.5 mmol/L EDTA、50 mmol/L HEPES-KOH ( pH 8.0) 、330 mmol/L sorbitol。 ( 6 ) 浓缩
日本VESSEL（威威）GT-P6EXD,GT-P6EXD(A
日本VESSEL（威威）气动螺丝刀: GT-S45.XD,GT-P4.5XD,GT-PLXD,GT-P6EXD,GT-P6EXD(A),GT-S6LXD,GT-P6LXD,GT-P60XD,GT-H2,GT-H4R,GT-H4PR,GT-PH4,GT-H4RC,GT-H5R,GT-H5P,GT-PH5,GT-H5RC,GT-S4.5DR,GT-P4.5DR,GT-PLP,GT-PLR,GT-PLRC,GT-PLZ,GT-P5LS,GT-PLHII,GT-P
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