Arcegel基质胶，无LDEV

产品简介

Arcegel Matrix, LDEV-Free基质胶是从富含胞外基质蛋白的EHS小鼠肿瘤中提取出来的可溶性基底膜制备物，其主要成分由层粘连蛋白，Ⅳ型胶原，硫酸乙酰肝素蛋白聚糖（HSPG）和巢蛋白等组成，还包含生长因子如TGF-beta、EGF、IGF、FGF、组织纤溶酶原激活物和EHS肿瘤自身含有的其他生长因子。在室温条件下，聚合形成具有生物学活性的三维基质，模拟体内细胞基底膜的结构、组成、物理特性和功能，有利于体外细胞的培养和分化，可用于对细胞形态、生化功能、迁移、侵袭和基因表达等的研究。

 

产品图片

 

 

产品规格

货号	规格
C231001E1/C231001E/C231001S	1.5mL/5 mL/10 mL

 

产品性能

性能	参数
产品线	Arcegel
产品规格	5/10 毫升
分类	基本类型
产品类型	基底膜基质
形态	冷冻
种类	EHS 小鼠肿瘤
浓度	8~12毫克/毫升
内毒素水平	低
酚红指示剂	包含
血清水平	无
LDEV 检测	无

 

产品储存

-20℃储存，有效期2年。干冰运输。

 

操作注意
1.Arcegel^TM基质胶冻融后，轻轻摇晃试剂瓶使Arcegel^TM基质胶分散均匀。
2.产品的分装、使用等操作需在无菌环境下进行，试剂瓶瓶盖可用 70％乙醇擦拭，并自然干燥。
3.与产品接触的实验器材（如：枪头、产品管等）使用前需预冷，以保证Arcegel^TM基质胶呈匀浆状。
4.Arcegel^TM基质胶会有色差变化（淡黄色到深红色），是由于酚红和碳酸氢盐与CO2作用引起的，但是与5% CO2 平衡后色差即会减少。
5.细胞可在0.5 mm厚度的Arcegel^TM基质层表面生长，也可在1 mm厚度的Arcegel^TM基质胶三维基质内生长。过度稀释的 Arcegel^TM基质胶会形成非胶质的蛋白层，可以用于细胞贴壁，但不能用于细胞的分化研究。
6.Arcegel^TM在 22-35℃温度环境下快速成胶，成胶后的Arcegel^TM基质胶可以在4℃ 24－48小时后重新呈液态。
7.融化后的Arcegel^TM分装在多个小管，所有分装均需用预冷的冻存管，迅速冷冻并保存，避免多次冻融。
8.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
9.本产品仅作科研用途！

 

操作说明

1. Arcegel^TM基底膜/基质胶的融化与保存

【注】：Arcegel^TM基质胶对温度非常敏感，千万不可多次重复冻融。Arcegel^TM基质胶的分装以及凝胶前的准备过程中都必须在冰上（4℃）操作，因为温度稍微提高，都很可能出现成胶现象，从而导致基质胶不均匀或者影响后续的凝胶。用来盛放的试管或者分装的枪头都必须进行预冷。

1. 收到产品后，如果暂时不使用，请整瓶直接放到-20℃冻存（不要放在无霜冰箱内）。
2. 第一次使用，将整瓶 Arcegel^TM基质胶放入冰盒内再放到4℃过夜，使其充分融解。

      2. Arcegel^TM基底膜/基质胶的使用特别注意

基质胶在22-35℃能够快速成胶。为了保证 Arcegel^TM基质胶的成胶性能与稳定性，最终稀释浓度不应低于3 mg/mL
（Arcegel^TM基质胶原液的浓度因批次不同有差异）。可用无血清培养基来稀释Arcegel^TM基质胶，稀释后需要立即使用。
a) 薄胶制备方法
融化后，用预冷的枪头混匀Arcegel^TM基质胶。
将需要使用的培养板置于冰上，按50 μL/cm²生长面积的浓度加入Arcegel^TM基质胶。
在37℃放置30min，此时平板即可使用。
b) 厚胶制备方法
融化后，用预冷的枪头混匀Arcegel^TM基质胶。
将需要使用的培养板置于冰上，将培养的细胞与Arcegel^TM基质胶混合，用遇冷的枪头使细胞悬浮均匀。按照150-200 μL/cm² 生长面积的浓度加入Arcegel^TM基质胶。
在 37℃放置 30min，此时即可加入细胞培养液。细胞也可生长在此厚胶的上层。
c) 薄层包被方法
融化后，用预冷的枪头混匀Arcegel^TM基质胶。
采用无血清培养基稀释Arcegel^TM基质胶到需要的浓度。建议根据具体的实验做个梯度实验，从而确定最佳的包被浓度。
将稀释的Arcegel^TM基质胶加入需要包被的培养器皿中，包被量至少覆盖细胞的所有生长表面。室温下孵育1小时。
去除未凝固结合的Arcegel^TM基质胶，用无血清培养基轻轻地冲洗。此时平板即可使用。
【注】：Arcegel^TM基底膜/基质胶包被的平板最好当天使用，但也可根据具体应用调整。包被好的平板加入培养基后，在37℃最久可存放1周。

 

产品优势

 

 

产品数据

1、细胞3D培养实验

【预冷处理】：24孔细胞培养板、移液枪头置冰上预冷，基质胶置冰上或4℃缓融；

【收集细胞】：取对数生长期的HepG2细胞，PBS轻柔润洗后，用胰蛋白酶消化细胞，终止消化后制备并收集单细胞悬液，1500rpm离心3min；弃上清，用DMEM完全培养基重悬细胞，血球计数板计数细胞后；

【形成细胞胶团】：调整细胞浓度为1.5×10⁵个细胞/mL。取缓融的基质胶和调整好浓度的单细胞悬液1：1冰上轻轻混匀，用预冷的移液枪头取40~50μL上述混匀单细胞悬液垂直滴于预冷24孔板中，使其形成拱型细胞液滴；

【培养观察】：置于37℃、5%CO₂饱和湿度的细胞培养箱内稳定30min后，每孔加入1~2mLDMEM完全培养基继续培养，每天观察并拍照记录。

 

图 HepG2细胞3D培养4d结果

2、细胞侵袭实验

【准备基质胶】：将冷冻的基质胶在4°C下融化，然后根据实验需要稀释至适当浓度。

【涂覆基质胶】：将稀释后的基质胶均匀涂覆在Transwell小室的聚碳酸酯膜上，确保基质胶完全覆盖膜的表面。

【固化基质胶】：将涂覆了基质胶的Transwell小室放置在37°C、5% CO₂的细胞培养箱中，让基质胶固化30min至1h。

【细胞准备】：将待测细胞悬液调整至适当的细胞浓度。

【细胞接种】：将细胞悬液加入到基质胶覆盖的Transwell小室中。

【培养】：将Transwell小室放入含有培养基的培养板中，放入细胞培养箱中培养一定时间（通常是24-48h）。

【侵袭细胞染色】：培养结束后，取出Transwell小室，用PBS清洗去除未侵袭的细胞，然后用固定液固定侵袭细胞，最后用结晶紫染色。

【统计分析】：使用显微镜观察并计数穿过基质胶并在膜下侧的细胞数量，以评估细胞的侵袭能力。记录实验数据，并进行统计分析以得出结论。

 

图 细胞侵袭后细胞结晶紫染色结果

3、体内血管生成实验

【预冷处理】：24孔细胞培养板、移液枪头置冰上预冷，基质胶置冰上或4℃缓融；

【基质胶铺胶】：将 24 孔培养板置于冰上，加入缓融的基质胶，使其平铺后置于37℃培养箱凝胶30min；

【收集细胞】：取对数生长期的Huvec细胞，PBS轻柔润洗后，用胰蛋白酶消化细胞，终止消化后制备并收集单细胞悬液，离心，弃上清，用DMEM完全培养基重悬细胞；

【接种细胞】：调整细胞浓度为1.5×10⁵个细胞/mL。将细胞置于37℃水浴20-30s，轻柔均匀的接种于凝胶表面。

【培养观察】：置于37℃、5%CO₂饱和湿度的细胞培养箱内稳定培养24h后，拍照观察。

 

图 HUVEC细胞血管生成结果图及血管免疫荧光染色结果

4、小鼠体内成瘤实验

【前期准备】：准备对数期生长的、细胞密度达80-90%左右的HepG2细胞，于收集细胞前一天晚上更换新鲜培养基。

【收集细胞】：胰酶消化细胞，待细胞变圆未脱离培养皿时，去除胰酶，加入无血清培养基制成细胞悬液，离心清洗一次，重悬至终浓度为1×10⁸个细胞/mL。

【制备注射细胞悬液】：将细胞悬液和基质胶在4℃环境下按1:1比例进行稀释，制备成终浓度为5×10⁷个细胞/mL。

【接种细胞】：左手抓取固定裸鼠，于裸鼠右肩处皮下注射，接种时，针头在皮下进针深一点，约1cm深，以减少注射后细胞悬液从针眼溢出，接种体积为200μL。(这一过程尽量在半小时内完成，途中细胞悬液放在冰上以减缓细胞凋亡及防止出现凝胶现象。）

【饲养观察】：将裸鼠放回笼内继续饲养，大约1周-1月左右可看到肿瘤出现，并根据实验设计在肿瘤体积不超过1000mm3前对裸鼠进行安乐si，并拍照。

 

                注射含基质胶                                                                                                          无基质胶

图 以HepG2细胞皮下接种至BALB/c-nu雌性小鼠，饲养1月观察结果

5、肿瘤类器官培养实验

实验步骤略

 

 

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产品类型	产品名称	货号	规格
Basic concentration	Arcegel Matrix LDEV-Free	C231001	5/10 mL
	Arcegel Matrix Phenol Red-Free, LDEV-Free	C231002	5/10 mL
Low growth factor	Arcegel Matrix GFR, LDEV-Free Matrigel	C231003	5/10 mL
	Arcegel Matrix GFR, Phenol Red-Free, LDEV-Free	C231004	5/10 mL
High concentration	Arcegel Matrix High Concentration, LDEV-Free	C231005	5/10 mL
	Arcegel Matrix High Concentration, Phenol Red-Free, LDEV-Free	C231006	5/10 mL
	Arcegel Matrix High Concentration, GFR, LDEV-Free	C231007	5/10 mL
Stem cell-specific	Arcegel Matrix hESC-Qualified, LDEV-Free	C231008	5/10 mL
Organoid-specific	Arcegel Matrix for Organoid culture, Phenol Red-Free, LDEV-Free	C231009	5/10 mL