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17α,20β-Dihydroxy-4-pregnen-3-

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  • ¥600 - 3200
  • 上海莼试
  • CS-01Y67789
  • 国产
  • 2025年07月14日
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    • 英文名

      17α,20β-Dihydroxy-4-pregnen-3-one

    • CAS号

      1662-06-2

    • 供应商

      上海莼试

    • 保存条件

      Store at -20°C

    • 规格

      1mg 5mg 10mg

    本产品仅供科学实验研究使用! 不能用于临床或动物诊断!
    产品名称17α,20β-Dihydroxy-4-pregnen-3-one产品货号CS-01Y67789
    规格1mg 5mg 10mgCAS号1662-06-2
    含量>98.00%分子式C21H32O3
    分子量332.5用途仅供科研研究使用
    化学性质:         
    产品细节图片1
     
    17α,20β-Dihydroxy-4-pregnen-3-one规格:1mg 5mg 10mg
    CAS:1662-06-2
    别名:17α,20β-DHP,17α,20β-dihydroxy   Progesterone
    化学名:17,20R-dihydroxy-pregn-4-en-3-one
    分子式:C21H32O3

    产品细节图片2
    分子量:332.5
    溶解度:1mg/mL in ethanol, 1mg/mL in methanol, 1mg/mL in   acetonitrile
    储存条件:Store at -20°C
    General tips:For obtaining a higher solubility , please warm the tube at 37 ℃ and shake it in the   ultrasonic bath for a while.
    Shipping Condition: Evaluation sample solution : ship with blue ice All other available size: ship with RT , or   blue ice upon request
    产品描述:
     
    产品细节图片3
     
    17α,20β-Dihydroxy-4-pregnen-3-one (17α,20β-DHP) is an endogenous, maturation-inducing steroid that stimulates oocyte maturation in females of several teleost species. For example, 1 μg/ml of 17α,20β-DHP applied to Persian sturgeon oocytes has been shown to effectively induce germinal vesicle breakdown, an essential step during oocyte maturation.1 Gonadotropin-releasing hormone and the gonadotropins, follicle-stimulating hormone and luteinizing hormone, have been shown to stimulate the production of 17α,20β-DHP either in vivo or in vitro.[2] 17α,20β-DHP has also been reported to influence spermiation by stimulating milt production when administered at 5 mg/kg to various male teleosts.[
    使用方法: 
    产品细节图片4
     
    1. 常用筛选浓度
      注意:用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型,培养基,生长条件和细胞代谢率而变化,推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve),即剂量反应性曲线,来确定最佳筛选浓度。
      一般而言,哺乳动物细胞50-500μg/mL;细菌/植物细胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
    2. 杀灭曲线的建立
      注意:为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株,需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素浓度,可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现,至少选择5个浓度。
    1) 第一天:未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上,37℃,CO2培养过夜;注:对于需要更高密度来检测活力的细胞,可增加接种量。
    2) 根据细胞类型,设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例,可设定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml,然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。
    3) 第二天:替换旧的培养基,换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。
    4) 接下来每3-4天更换新的含药物培养基。
    5) 按照固定的周期(如每2天)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数(通常是7-10天)内能够杀死绝大多数细胞的浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。
    3. 稳定转染细胞的筛选
    1) 转染48h后,用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞(直接传代或者稀释后传代)。
      注意:细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤。则当细胞过于稠密,其效率会降低。为了得到较好的筛选效果,最好将细胞稀释至丰度不超过25%
    2) 每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。
    3) 筛选7天后观察并评估细胞克隆(集落)的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间,这取决于宿主细胞类型,转染,以及筛选效果。
    4) 挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板,继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
    5) 之后更换正常培养基培养即可。
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    产品细节图片5
     
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    蛋白酶抑制剂混合物实验步骤: 
    产品细节图片6
     
    (1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
    (2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
    (3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
    (4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::yi戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
    (5)取上清,等体积的yi戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
    (6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
    (7)10,000rpm,4℃离心20min
    (8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
    (9)酚::yi戊醇(25:24:1)抽提两次,:yi戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
    (10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
    (11)12,000rpm,4℃离心20 min
    (12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
    (13)加200ul的DEPC处理水溶解
    (14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)


     

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