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一、RACE引物设计的原则
(1).首先引物与模板的序列要紧密互补，其次引物不能在模板的非目的位点引发DNA 聚合反应(即错配)。
(2).引物长度以23-28 nt为宜。
(3).引物中的GC含量一般为50%-70％，GC、AT分布均匀，应尽量避免局部富含GC或AT。
(4).引物最好不形成二级结构（发夹结构等），与5′RACE Outer Primer和5′RACE Inner Primer不能形成复杂结构。
(5).引物3′端的3～4个碱基不要与配对引物形成互补序列。
(6).使用高特异性引物，利用特异性引物增加目的片段的特异性，从而提高目的片段的克隆效率。
(7).使用Primer Premier5 ，查询引物 5`RACE 3`RACE 最后先点 Tm 再点 Rating，选择前面得分高的， 程序前两步按标准程序走，最后一步就按引物的 Tm 走，一般选预计长度 200 以上的，跑胶比较好看。
二、RACE反应中的一些注意事项
(1).cDNA的合成起始于polyA+RNA。如果使用其它的基因组DNA或总RNA，背景会很高。
(2).RACE-PCR的效率取决于总的mRNA中目的mRNA的量和不同的引物有不同的退火和延伸温度。
(3).在进行5‘和3’RACE-PCR的时候应该使用热启动。
(4).引物GSP中的GC含量要在50－70%之间。这样可以使用降落PCR。避免使用自身互补性的引物序列，否则会产生回折和形成分子内氢键。另外，避免使用与AP1互补的引物，尤其是在3‘末端。
(5).如果要用重叠片段来检测设计的引物，GSp1和GSp2之间至少是100－200碱基。只有这样才可以用扩增的产物来鉴定设计的引物是否正确。
(6).降落PCR可以明显的增加RACE PCR产物的特异性。在最开始的循环中，退火温度高于AP1引物的Tm值，可以增加对特异性条带的扩增。随后的退火和延伸的温度降回到AP1的温度，可以进行随后的PCR循环。
三、提高RACE技术效率的几点建议
(1).选择合适的RACE技术可以有效地扩增所需要的目的片段。最好是查阅相关文献，并且做一些预备实验，从而确定合适的RACE技术。
(2).在RNA提取过程中应注意RNA的完整性，完整的RNA结构会减少非目的片段或者不完整片段的产生。
(3).应用巢氏PCR。巢氏PCR利用两对不同的引物精确地克隆所需的目的片段。应用巢氏PCR设计引物时，在引物中加入特异性序列和适当的酶切位点，一方面可以增加对目的片段的特异性克隆，另一面也方便后续的测序和试验。将巢氏PCR与RACE技术结合可以提高克隆的准确度
(4).选用耐热酶。在逆转录过程中使用较高的温度，不仅利于RNA二级结构打开和逆转录酶的结合，还可以加快RT-PCR反应速率，有利于RT-PCR反应的进行。但过高的反应温度会降低逆转录酶的活性，因此选用耐热性高的逆转录酶即可以在高温下反应，又能保持高的酶活，保证RACE的质量。
(5).选择适合的加尾碱基。在5‘端加尾需要选择poly A或poly G，poly A在与引物结合的能力比poly G弱，这时候可以从模板中（G+C）%来考虑选用哪种加尾碱基。通常（G+C）%高的时候，选用poly A，而（G+C）%低的时候可以选用poly G。这样一方面可以使退火温度在合适的范围，另一方面可以降低引物非特异性结合的几率
四、关于RACE产物的验证
1.对于RACE产物的验证是有用且必要的，因为你很有可能得到的是多条带或者研究的是多基因家族的成员，目前有三种方法：即
(1)比较由GSP和NGSP获得RACE产物。
(2)Southern杂交。
(3)克隆并测序。
2.比较由GSP和NGSP获得RACE产物。
(1)对于5‘末端的RACE产物，比较由AP1和GSP1扩增出来的产物和由AP1和NGSP1扩增出来的产物。
(2)对于3‘末端的RACE产物，比较由AP1和GSP2扩增出来的产物和由AP1和NGSP2扩增出来的产物。这对于鉴定多条带是否是上一个PCR的特异性产物是非常有用的。
(3)如果条带是正确的，在嵌套PCR反应中的条带应该是略微小一些。基本PCR和嵌套PCR产物的迁移率的不同取决于cDNA结构中GSP1和嵌套引物的位置。
3.RACE产物的克隆和测序：
(1)可以利用胶回收试剂盒来回收RACE产物，试剂盒适合回收2.5kb以下的RACE产物；对于长的片段，可以通过电洗脱获得好的结果。如果选择使用其他的纯化方法，最后用Tricine－EDTAbuffer30μl重新悬浮DNA样品。
(2)电泳5μl回收的样品来鉴定回收的质量。
(3)将回收的PCR产物直接克隆到/A型的PCR克隆载体中。另外还可以利用接头和/或cDNA合成引物中的Not1、Srf1、Xma1、Ecor1等酶切位点，将产物克隆到常规载体中
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文献和实验具有遗传上共同体质特征的人群，人们称这种人群为人种。人种之间有明显的区别。所谓人种与群体大小无关，大的群体有：白色人种、黄色人种等，象暇夷人、日本人，那样的小群体也可以称之为暇夷人种、日本人种。人种，大体上可看作相当于动物学上的变种或地方类型。所谓人，由于过去人种间的混血等复杂问题，要想严格地按动物特性或动物学的分类范畴加以阐述是困难的。作为区分人种标志的体质特征在全人类间有很大的变异，而应选择有强烈遗传倾向的体质特征，具有这种性质的体质特征彼称为人种特征。但实际上人种特征在各人
实验概要 完成这个RACE需要全套反转录系统，当然选一个好的反转录酶（无RNase H），dUTP，taq酶，Uracil DNA glycosylase ，还有这几条引物： Adapter A AUCUCGAGUUCGCGCCGGAUCC(T) 25 VN cDNA synthesis and adapter-A incorporation Adapter B
近年来随着生物技术的不断发展，出现了许多克隆新基因的方法和手段，如图谱克隆技术、转座子标签技术、mRNA差异显示技术二基因组减法技术以及cDNA文库筛选技术等。但上述方法人多具有实验周期长、技术步骤烦琐且工作量大等特点。cDNA末端快速扩增技术（rapid amplification of cDNA ends，RACE）是一种基于PCR从低丰度的转录本中快速扩增cDNA的5'和3'末端的有效方法，以其简单、快速、廉价等优势而受到越来越多的重视。（相关阅读：精华vol 687
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