免疫沉淀及免疫共沉淀服务

★服务内容：

1．温和条件下进行蛋白抽提， BCA 定量，调整蛋白浓度；

2．样品预处理：用 Protein A / G Sepharose 孵育（进行 WB 验证可以免此步骤）；

3．样品与 P 抗体进行孵育，之后加入 Protein A / G - Agarose 进行孵育；

4.洗涤 Protein ANG Sepharose - Antibody - Protein complex ，并对免疫复合物进行变性处理；

5．沉淀产物 SDS - PAGE 或者 WB 鉴定，质谱鉴定由客户自行确定；

6. Western blot 检测：

a ）电泳：聚丙 烯 酰 胺 凝胶（ SDS - PAGE ）分离蛋白样品；

b ）湿法转印（ BLOTING : Tank Transfer )；

c ）杂交：用抗体鉴定膜上的特定蛋白（ INCUBATION : Antibody )；

d ）化学发光检测（ ECL )，胶片曝光。

7．预实验及正式实验服务。

★需要提供的信息：

1．新鲜或正确保存的样品：

a ）细胞＞1x10^7：组织＞100mg：细菌湿重＞1mg ：植物＞100mg；血清＞50ul。

b ）样品蛋白浓度＞ 1mg / ml ，蛋白量＞200ug／样品。

2．目的蛋白一抗，空白或者阴性同种属 IgG。

3．阳性对照样品（尽量提供）。

4．相关文献（可选）。

 

★服务周期：

3-4周。

 

★结果内容：

1. 预实验曝光结果（胶片及扫描图），预实验采取2个一抗稀释度；

2．正式实验曝光结果（胶片及扫描图）；

3．完整实验报告；

4. IOD 值分析报告（可选）。

 

★实验须知：

1．待检测样品可以是待检测蛋白样品，也可以是细胞、组织等其他样品；

2．免疫沉淀用抗体；

3．检测用抗体；

4．特异性二抗；

5．对照设置：由客户提供

a ）空白：无抗体，只有 protein A / G；

b ）阴性对照：无蛋白，有抗体及 protein A / G；

c )阴性对照：未转染细胞或者基因敲除样品；

d )对应的无关空白抗体：Normal IgG；

e )蛋白裂解液上清：Input。