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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
2~8℃
- 库存:
99
- 供应商:
上海普时如生物科技有限公司
- 规格:
50ml
试剂组成
| A20120A0101 | 规格 | 数量 |
| RIPA裂解液 | 50 mL/瓶 | 1瓶 |
| 说明书 | 1份 |
该产品主要成分有Tris•HCl pH8.0, NaCl,1%SDS, PMSF等多种抑制剂,可以有效抑制蛋白降解。
运输与储存
本产品采用冰袋或常温运输(根据目的地和同运产品而定)。产品在收到后应立即贮存于4℃。
如果贮存于4℃, 有效期为运达后一年。
产品使用限制
本产品只用于分子生物学研究。其不应用于诊断、预防和治疗疾病。在使用本产品时应遵从相应的注意事项。
操作说明(以下为蛋白提取参考步骤,具体操作根据各实验室经验为准)
组织:
1、称取一定量(80-120 mg)组织,加入5倍体积(400-600μL)单去污剂裂解液后剪碎组织;
2、用电动匀浆机或组织破碎仪器破碎,室温放置5min,使其充分裂解;
3、4℃ 12000 rpm离心10 min取上清液使用;
细胞样本:
1、107个细胞加500μL该裂解液(一般6孔板长满1孔细胞,每孔加200μL裂解液,覆盖整个细胞底面即可);
2、将细胞刮下,边刮边用移液器吸取裂解液吹打细胞至细胞全部吹下,冰上放置30min充分裂解;
3、将裂解液移至离心管中,4℃ 12000rpm离心5min取上清液使用。
注意事项
1、本产品中含SDS在低温情况下容易形成结晶,请在室温平衡或摇匀至液体清澈透明后使用;
2、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴防护手套操作。
风险提示:丁香通仅作为第三方平台,为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全,合理判断,谨慎选购商品,商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品,请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验1ml RIPA buffer contains 35μl proteinase inhibitor(sigma cat no P8340) and 10μl phosphatase inhibitorRIPA buffer 最终浓度1M Tris-HCl pH7.5) 5 ml 50mMNaCl 0.87g 0.15 MNa-deoxycholale 0.1g (1%)0.5M EDTA(pH8.0) 0.8mlNaF 41 mgNonidet P40 1 ml (1%)Aprotinin
质粒的TE缓冲液中有EDTA。如果哪天你手上正好缺了溶液I,可不可以抽提质粒呢?实话告诉你,只要用等体积的水,或LB培养基来悬浮菌体就可以了。有一点不能忘的是,菌体一定要悬浮均匀,不能有结块。 轮到溶液II了。这是用新鲜的0.4 N的NaOH和2%的SDS等体积混合后使用的。要新从浓NaOH稀释制备0.4N的NaOH,无非是为了保证NaOH没有吸收空气中的CO2而减弱了碱性。很多人不知道其实破细胞的主要是碱,而不是SDS,所以才叫碱法抽提。事实上NaOH是最佳的溶解细胞的试剂,不管是大肠杆菌还是哺乳
),再次用玻棒温和彻底地混匀内容物,在冰上放置至少1h。 6、以4℃【用Beckman Ti50型转头(或与其相当的转头)】,30 000rpm离心30min,小心将上清转移到一个50ml的一次性塑料离心管中,弃去沉淀物。如果细菌碎片未能全部除尽,可用35 000rpm再离心20min,将上清转移到另一管中,去掉存在离心管内的粘稠状液体。 7、上清分别用酚/氯仿和氯仿各抽提1次。 8、将水相转移到250ml的离心瓶中,于室温加入2倍体积的(约60ml )乙醇,充分
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