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真菌核糖体基因转录间隔区(Internal Transcribed Spacer,ITS),位于真菌核糖体 DNA(rDNA)上 18S 和 28S 基因之间的区域片段,主要包括 ITS1,5.8S rDNA,ITS2,其两侧分别是 18S RNA 基因和 28S RNA 基因。ITS 序列由于选择压力小,在自然中变异快,在绝大多数真菌中表现出序列多态性,表现为种内相对一致,种间差异比较明显。ITS 测序即是对 ITS1 或者 ITS2 进行测序,非常适合真菌鉴定以及系统发育分析。

1.基于权威数据库,鉴定真菌到“种”;
2.优化的扩增引物和反应条件,使菌种鉴定更丰富更准确;
3.真菌群落多样性分析内容丰富,菌落鉴定、丰度与结构分析,系统进化分析等。
二、测序策略 :MiSeq,PE300。
三、技术路线:基因组 DNA→ITS 区PCR 扩增→扩增产物回收纯化→上机测序→数据分析。
四、分析内容:1.原始数据的产出统计与预处理;
2.数据拼接及质量评估和长度分布统计;
3.两组或多组比较 Venn 图,物种累积曲线(species accumulation curves);
4.Alpha 多样性分析(稀疏曲线,Shannon 指数,Simpson 指数,Chao1 指数);
5.Beta 多样性分析(PCoA 分析,UPGMA 分析,PCA 分析,NMDS 分析,Anosim 分析);
6.比对到 RDP 和 unite,进行物种分类;
7.单样本群体结构分析(“鉴定到种”);
8.聚类分析(Heatmap 图分析)和柱状图分析;
9.组间差异分析;
10.系统发育进化树(Phylogenetic trees)构建。
五、样本类型:1.菌体,环境样品,总 DNA 等;
2.建议总 DNA 起始量:>20ng(较纯 DNA,无宿主及其他杂质污染)。
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