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双萤光素酶报告基因检测(Dual-Luciferase Reporter Assay)是先以萤光素(luciferin)为底物来检测萤火虫萤光素酶(Firefly luciferase),后以肠腔素(coelenterazine)为底物来检测海肾萤光素酶(Renilla luciferase),并且在后续加入海肾萤光素酶底物时,同时加入抑制萤火虫萤光素酶催化luciferin发光的物质,该物质可以淬灭约99.9%以上的萤火虫萤光素酶信号,使后续检测仅仅检测到海肾萤光素酶的活性,从而实现双萤光素酶报告基因检测。
通常把感兴趣基因的转录调控元件或5'启动子区克隆在luciferase的上游,或把3'UTR区克隆在luciferase的下游等,构建成报告基因(reporter gene)质粒。然后转染细胞,用适当药物等处理细胞后裂解细胞,测定萤光素酶活性。通过萤光素酶活性的高低来判断药物处理等对目的基因的转录调控作用。Renilla luciferase相对更多地被用作转染效率的内参,以消除细胞数量和转染效率的差异。
碧云天拥有系列自主研发、高性能、数据稳定、检测快速的萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG027/RG028),凭借一系列高质量试剂盒产品,以及多年积累的丰富检测经验,确保报告基因检测数据准确、稳定、可靠。详细的双萤光素酶报告基因检测技术服务介绍请点击碧云天双萤光素酶报告基因检测技术服务介绍 。
碧云天双萤光素酶报告基因检测技术服务项目表:
| 服务编号 | 服务名称 | 服务时间 | 全额预付特价(元) | 半额预付特价(元) | 零首付价(元) | 服务内容 | 交付结果 |
| T5501 | 报告基因质粒构建 | 7-10个工作日 | 1.0元/bp | 1.1元/bp | 1.2元/bp | 构建报告基因质粒 | 提供质粒干粉; 酶切报告。 |
| T5502 | 细胞培养、处理与转染 | 10-15个工作日 | 2000元/次 | 2300元/次 | 2500元/次 | 细胞培养,质粒转染以及细胞干预处理 | 萤光素酶活性检测报告,含数据分析 |
| T5503 | 启动子活性检测 | 1-2个工作日 | 1800元/次 | 2000元/次 | 2200元/次 | 多功能酶标仪检测RLU值 | |
| T5504 | microRNA与靶基因互作 | 1-2个工作日 | 1800元/次 | 2000元/次 | 2200元/次 |

图A, B:Dual-Lumi™双萤光素酶报告基因检测试剂盒对萤火虫萤光素酶报告基因质粒和海肾萤光素酶报告基因质粒共转染的不同数量的HeLa细胞的检测效果。说明该试剂盒的检测灵敏度高,测定样品的线性范围宽。图C:HeLa细胞转染启动子报告载体(X-pGL3-Basic)、转录因子载体以及内参载体(pRL-TK)以验证转录因子与启动子的具体结合位点。
碧云天双萤光素酶报告基因检测技术服务询价与订购:
- 请您下载并填写《碧云天双萤光素酶报告基因检测生物样品信息表》,发送至邮箱,我们的专业技术人员将在第一时间为您提供准确报价。
- 若有订购意向,碧云天的技术服务人员会与您联系,并签订碧云天双萤光素酶报告基因检测服务协议书。
- 若需要寄送细胞或者报告基因质粒,请下载并填写《碧云天双萤光素酶报告基因检测生物样品信息表》,发送至碧云天双萤光素酶报告基因检测技术服务人员邮箱,具体要求参见《碧云天双萤光素酶报告基因检测生物送样要求》。
碧云天双萤光素酶报告基因检测技术服务优势:
- 一站式服务 提供从报告基因质粒构建、细胞转染,加药处理到检测的一站式服务。
- 高品质保证 碧云天拥有一系列自主研发的萤光素酶报告基因检测试剂盒,可供客户灵活选择。
- 详尽的报告 提供完整实验报告以及所有原始数据,承诺数据真实可靠。
碧云天双萤光素酶报告基因检测技术服务流程
碧云天双萤光素酶报告基因检测技术服务承诺
碧云天承诺提供准确、稳定、可靠的萤光素酶报告基因检测数据及报告,含:
- 酶标仪原始数据;
- 数据分析、统计作图;
- 完整实验报告(包括详细实验步骤);
- 剩余质粒,酶切报告(如适用)。
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文献和实验也可以在体内分析。具体的细胞转染及所需的后续步骤因细胞种类及转染方法等各不相同。我们实验室比较擅长的是基于报告基因检测的药物筛选方法,具体来说就是利用荧光素酶这一报告基因建立的多种药筛模型。各种报告基因的比较报告基因优点缺点氯霉素乙酰转移酶基因(CAT)在哺乳动物中没有内源性活性;可用自动化的ELISA方法检测线性范围窄;灵敏度相对较低;需要使用放射性同位素 β-半乳糖苷酶基因(β-Gal)蛋白稳定;生物或化学发光检测灵敏;不需要使用同位素在哺乳动物细胞中有内源性活性人生
janetlee1976 在构建萤光素酶报告基因载体的过程中,我把一个基因的一部分启动子插入到载体中(包含该基因转录起始点),请问是否需要为了避免载体中编码萤光素酶的基因的移码突变,而在转录起始点以下所包含的碱基数必须为3的整倍数呢?比如所包含启动子区域为-1000!~+27(此处是否必须为3的整倍数) woxingwosu 我觉得只要从翻译开始,即ATG, 保持碱基数必须为3的整倍数就可以了。前面的启动子部分没有必要。最好
【求助】请教一个关于双荧光素酶报告基因检测系统中共转染两种报告基因质粒的比例的问题?
lsdcfhyj 用双荧光素酶报告基因检测系统进行报告基因检测时需要共转染两种荧光素酶报告基因质粒,但是我不知道两种质粒间的比例是多少,有哪位前辈做过这方面实验的,请帮我指点一下,谢谢了 xxshc 这个比例没有特别的规定。我用的pRL-TK(海蜃素荧光素酶)的荧光值要高一些,我转20ng/孔(24孔板),作为内参.pGL3(萤火虫荧光素酶)的荧光值低一些,我转0.4ug/孔(24孔板)然后0.4ug的调整质粒。这样的话,萤火
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