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- 香港
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- 2025年07月16日
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100mL
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文献和实验3）， 10% 胎牛血清。传代：吸去培养液。 用 0.25% (w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA 洗一次，以去除血清（血清会抑制胰酶的活性）。加 2 - 3 毫升 Trypsin-EDTA，放在 37℃ 培养箱内约 5 分钟，直到细胞全部脱落。加 6 - 8 毫升培养液，用移液器把细胞吹散。加适量的细胞到新的培养器皿中。（以 1：4 到 1：8 为宜，传代期间培养液更换 1 - 2 次）冻存：95% 培养液 + 5% DMSO 冻存于液氮。2. 293 细胞293 细胞比较容易转染
。其所显示的染色体带纹清晰，普通显微镜下可以分辨，标本可长期保存，因此被广泛应用。实验步骤（以下以贴壁培养细胞为例）一、实验准备1）细胞完全培养基：根据细胞类型和实际需要确定2）细胞消化液：0.25% Trypsin-EDTA3）磷酸缓冲液（PBS）：pH7.44）秋水仙素（或者秋水仙胺）溶液：20 μg/mL5）低渗液：0.075 M KCl 溶液6）固定液（新鲜配制）：甲醇：冰醋酸 = 3：17）Giemsa 染色液：先配置 1% Giemsa 原液（以甘油，甲醇配制），再以 PBS 稀释 10 倍
，Rb，TopoismeraseⅡ 等。 2、酶消化方法 常用 0.1% 胰蛋白酶和 0.4% 胃蛋白酶液。胰蛋白酶使用前预热至 37℃，切片也预热至 37℃，消化时间约为 5~30 分钟（胰酶的最终浓度可以根据使用者的要求进行调整，浓度范围可以从 0.05% 至 0.25% ）； 胃蛋白酶消化37℃ 时间为 30 分钟。皂素（Saponin）：一般使用浓度为2~10mg/ml的saponin 溶液，消化时间为室温孵育 30 分钟。 适用于被固定遮避的抗原，其中有：Collagen
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