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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃ to -80℃
- 保质期:
12个月
- 英文名:
SGK1 Protein, Human
- 库存:
99
- 供应商:
北京义翘神州科技股份有限公司
- 规格:
10 µg
蛋白名称:SGK1, Active
蛋白构建:Recombinant human SGK1 (60-end) was expressed by baculovirus in Sf9 insect cells using an N-terminal GST tag.
表达宿主:Baculovirus-Insect Cells
蛋白分子量:~73 kDa
蛋白NP号:NM_005627
蛋白氨基酸序列:60-end
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文献和实验今天进行了GST融合蛋白的表达,pGEX-4T-1载体,BL21菌。 步骤:摇菌至A600:0.7,然后加IPTG诱导3小时,温度35度(终浓度:0.3mM),取1ml诱导后菌,离心去培养基,冰冷PBS洗一次,离心,吸净液体,加入1*上样缓冲液50微升和终浓度1mM PMSF,100度煮菌5分钟,离心,取20微升上清跑胶。结果如图。 1.空载体对照有GST的表达 2.所有重组载体同样有GST大小的片断,(箭头 B) 3.箭头A所示的条带在空载体和重组载体处有明显差异。 4.我的目的蛋白
原理 GST 纯化系统是利用GST (glutathione-S-transferase )融合蛋白与固定的谷胱甘肽(GSH)通过硫键共价亲和,通过GSH交换洗脱的原理来进行纯化 。1ml树脂大约可结合5-8 mg融合蛋白,并可反复使用数次。试剂u IPTG(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷) 2g IPTG 溶解入10ml 水,过滤除菌,分装,-20℃保存。u Lysis buffer (50ml)1)2.5ml 1 M Tris,pH8.0 2)0.1ml 0.5ml EDTA 3)0.292
相关专题 蛋白表达技术全攻略 本指南介绍了大规模和小规模GST蛋白表达 和纯化的方法。由于蛋白的多样性,因此推荐先进小规模表达及纯化测试。 材料与试剂 1. IPTG (Sigma) 2. 咪唑 (Sigma) 3. 蛋白酶抑制剂 (Roche) 4. 溶菌酶(Sigma) 5. 谷胱甘肽 琼脂 糖 4B 珠 (Pierce 15160) 6. 谷胱
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