人合子阻滞基因1(ZAR1)ELISA试剂盒

【原创】基因组编辑三大工具ZFN、TALEN、CRISPR/Cas9筛选基因敲除细胞系阳性克隆Protocol

的上下游序列， 设计合适的引物，并从提取的基因组中扩出目的片段，然后选择部分阳性克隆进行PCR产物或做T载克隆送测序进行最终确认。目前推崇的各种识别错配碱基的酶切鉴定方法及Surveyor assay试剂盒由于假阳性过高及过于昂贵，一般实验室我们不建议使用。少数试剂酶公司对于酶的推荐有利益因素驱动，希望各位战友注意甄别，土豪请忽略。(*^__^*) 运用CRISPER-Cas9技术进行癌细胞系的基因敲除，我们的经验是若设计的CRISPER-Cas9载体表达水平够高，敲除效率够高，此步骤多数时候可以直接

人细胞因子引物资料、EMSA等可索取

，用Promega公司提供的Wizard基因组DNA提取试剂盒提取DNA， DNA置 4C保存待测。 TNF alpha -308G/A (TNF1/TNF2)的检测： 上游引物5’-AGGCAATAGGTTTTGAGGGCCAT-3’下游引物5’-TCCTCCCTGCTCCGATTCCG-3’，PCR参数：95C预变性2 min，进入35个循环：95C，1min; 56C,40 s; 72C,30 s。最终延伸72C，7 min。扩增含-308位点的片段107bp。经Nco I酶切4h

【交流】测序常见问题分析

一致。 4：过短的PCR产物为什么不适于直接测序？首先由于一般的PCR产物纯化试剂盒要求产物片段大于200bp,过短的PCR产物不能进行纯化；再者，测序的前50bp和后50bp的序列是不好的，所以不适于直接测序。 5：酒精如果没有挥发完全,在约300bp处会出现连续异常的G峰，酒精挥发时间过长会导致DNA断裂。 第一个峰，重叠干扰。如果不判读为干扰峰，那就说明样品不纯，如果是基因组DNA，就很好地说明了样品为杂合子，该位点可能存在SNP现象（T/G）。如果判读为干扰峰，我们只需认定样品此处碱基为T为行