柱式法提取植物RNA试剂盒

试剂盒采用柱式法来提取植物RNA，本试剂盒无需使用DNA酶也可以很好的吸附并去除基因组DNA，使用本试剂盒提取的RNA无蛋白和其他杂质污染，可用于RT-PCR、荧光定量PCR、体外翻译和分子克隆等多种下游实验。本试剂盒无需使用苯、氯仿等有毒试剂，操作安全，用时短。
操作步骤(仅供参考)：
1.样品处理：将新鲜或-80℃冰箱的植物组织样品用液氮研磨成粉末状，称取50-100mg的粉末，加入到含有500μL裂解液(使用前请加入5%β-巯基乙醇或5%1MDTT)的1.5mL离心管中，立即剧烈涡旋振荡30s，使其充分裂解，室温放置5-10min，4℃，12000rpm离心10min。
注意：操作前在裂解液中加入5%β-巯基乙醇(可用1MDTT代替β-巯基乙醇)，如每475μL裂解液中加入25μLβ-巯基乙醇或25μL1MDTT，此裂解液建议现配现用。
2.吸取上清到新的1.5mL离心管中(若吸取的上清中有杂质可再次离心去除)，加入0.5倍上清体积的无水乙醇，混匀后加入到吸附柱中，4℃，12000rpm离心2min，弃滤液（留收集管，用于步骤4）。
3.将吸附柱放到干净的收集管上，在吸附柱中加入500μLRNA洗脱液（使用前请确认是否已加入无水乙醇），4℃，12000rpm离心2min，收集滤液。
4.在滤液中加入250μL无水乙醇，混匀后加入到新的吸附柱中（收集管使用步骤2中的收集管），4℃，12000rpm离心2min，弃滤液。
5.向离心管中加入500μL漂洗液Ⅰ（使用前请确认是否已加入无水乙醇），4℃，12000rpm离心1min，弃滤液。
6.向离心管中加入600μL漂洗液Ⅱ（使用前请确认是否已加入无水乙醇），4℃，12000rpm离心1min，弃滤液。
7.重复操作步骤6。
8.4℃，12000rpm离心2min，将吸附柱敞口室温放置5min，以除去多余的乙醇。
9.将吸附柱放到一个干净的离心管上，向吸附柱中加入50-100μLRNase-freeH2O，室温放置2min，4℃，12000rpm离心2min，得到RNA溶液，RNA保存于-80℃。
注意事项：
1.所有相关器皿耗材都应为RNase-free产品，操作过程要小心，带口罩、手套避免环境中RNA酶污染样品。
2.在提取RNA的过程中尽量在低温下操作。
3.尽量使用新鲜的幼嫩的植物组织进行RNA的提取，如果提取的RNA有基因组DNA的污染，则减少植物组织使用量。
4.洗脱液的体积不应少于50μL，体积过少会影响提取效率，RNA产物应保存在-80℃，以防RNA降解。
RNA浓度及纯度检测：提取的RNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。OD260/OD280比值应为2.0-2.2。

提取50mg吊兰组织RNA，进行核酸电泳胶图对比；提取的洗脱体积均为50μL，RNA上样量2-4μL，琼脂糖凝胶浓度为1%，125v 电泳30min。

提取50mg吊兰组织RNA，浓度及比值结果。