pShuttle-CMV-N-DsRed(腺病毒质粒，红色荧

产品简介：
pShuttle-CMV-N-DsRed (腺病毒质粒, 红色荧光)是碧云天自行研发的用于构建表达N端DsRed(红色荧光蛋白)融合蛋白的重组腺病毒包装用的穿梭质粒。本穿梭质粒构建后，需要和预转染了pAdEasy-1质粒的BJ5183菌株以及重组腺病毒包装细胞配合使用才能完成重组腺病毒的包装。

pShuttle-CMV-N-DsRed质粒可以用于在包装成腺病毒后表达N端含DsRed (Discosoma sp. red fluorescent protein，香菇珊瑚红色荧光蛋白)标签的融合蛋白。该质粒含有CMV启动子，可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达。在多克隆位点的前面有一个DsRed的完整编码序列，因此在多克隆位点根据阅读框插入目的基因就可以表达N端含有DsRed标签的融合蛋白。利用DsRed的荧光特性可以比较容易地观察融合蛋白的表达水平和细胞内定位，也可以利用DsRed抗体来检测或免疫沉淀融合蛋白。DsRed与GFP没有序列同源性，不能使用GFP抗体检测DsRed。

本质粒为卡那霉素抗性。

重组腺病毒(Recombinant adenoviruses)是一种常见的用于在培养细胞或动物体内表达外源基因的重要工具。重组腺病毒具有感染宿主细胞范围广、感染不依赖细胞分裂、高滴度及目的基因表达水平高等特性。最常用的腺病毒载体是人类血清5型腺病毒。改造后的人类血清5型腺病毒，删除了在病毒装配过程中起关键作用的E1基因和非必须的能表达逃避宿主免疫的E3基因，E1和E3基因的删除使得重组腺病毒不能自我复制，同时给外源基因的插入提供了空间，最长可插入7.5kb的外源基因。从而提高了重组腺病毒的的安全性和可操作性。再利用携带E1基因的AD-293、293A、HEK293等细胞作为包装细胞就可以完成重组腺病毒的包装。

pShuttle系列的穿梭质粒携带外源目的基因，经过Pme I线性化，随后与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1(D8106)共转化到大肠杆菌BJ5183中，或者转化到已经预转化了pAdEasy-1质粒的BJ5183菌株(D8107)中同源重组。BJ5183菌株表达recET基因，具有很高的基因同源重组(homologous recombination)活性，使带有目的基因的穿梭质粒与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1通过末端反向重复序列同源重组，实现外源基因与腺病毒基因组的整合。将重组的携带外源基因的腺病毒质粒用Pac I线性化后转染到AD-293、293A、HEK293等重组腺病毒包装细胞中进行包装。从而制备获得高滴度、自我复制缺陷并且带有目的基因的重组腺病毒。

目的基因引入时不能含有Pme I及Pac I这两个酶切位点，如果含有该两个酶切位点的目的基因，需要对该位点进行突变方可进行基因操作。

pShuttle-CMV-N-DsRed主要信息如下：

Feature Nucleotide	Position
left inverted terminal repeat	1–103
encapsidation signal (ES)	183–331
CMV promoter	341–933
DsRed	947-1626
multiple cloning site	1628–1676
SV40 polyA	1688–1899
Ad5 right arm homology	1904–4159
Ad5 left arm homology	4246–5089
right inverted terminal repeat	5090–5192
pBR322 origin	5440–6067
kanamycin resistance ORF	6876–7667

pShuttle-CMV-N-DsRed 质粒(8153bp)的图谱如下：

pShuttle-CMV-N-DsRed质粒的详细图谱见说明书

pShuttle-CMV-N-DsRed 中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pShuttle-CMV-N-DsRed)包括：

Acc65 I	Afl II	Age I	Asc I	Asp718
Blp I	BsiC I	BsiW I	BstB I	Bsu36 I
Cla I	Eco72 I	EcoN I	Esp I	Fse I
Kpn I	Nru I	Pml I	Pvu I	Sfi I

pShuttle-CMV-N-DsRed 中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pShuttle-CMV-N-DsRed once)包括：

SnaBI	TAC|GTA	679	ScaI	AGT|ACT	1681
NheI	G`CTAG,C	940	HpaI	GTT|AAC	1798
NotI	GC`GGCC,GC	945	BstXI	CCAN,NNNN`NTGG	3015
StuI	AGG|CCT	1163	Bst1107I	GTA|TAC	4171
BamHI	G`GATC,C	1628	XcaI	GTA|TAC	4171
HindIII	A`AGCT,T	1634	PmeI	GTTT|AAAC	4192
EcoRV	GAT|ATC	1642	EcoRI	G`AATT,C	4197
SalI	G`TCGA,C	1646	AvrII	C`CTAG,G	4739
MluI	A`CGCG,T	1652	BspHI	T`CATG,A	6135
PaeR7I	C`TCGA,G	1664	Psp1406I	AA`CG,TT	6534
XhoI	C`TCGA,G	1664	RsrII	CG`GWC,CG	7540
XbaI	T`CTAG,A	1670	XmnI	GAANN|NNTTC	8141
SpeI	A`CTAG,T	1676

pShuttle-CMV-N-DsRed 质粒中推荐使用的测序引物序列如下：

forward primer (888-907): 5´GGTCTATATAAGCAGAGCTG3´

Reverse primer (1690-1712): 5´GTGGTATGGCTGATTATGATCAG 3´

pShuttle-CMV-N-DsRed的全序列信息:pShuttle-CMV-N-DsRed序列.txt。

保存条件：

-20℃保存。

注意事项：

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。