- ￥145
- 碧云天（beyotime）
- D0371
- 国产
- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
现货
- 保质期：
两年
- 供应商：
上海经科化学科技有限公司
- 保存条件：
-80 ℃
- 规格：
200μl
产品简介：
碧云天生产的Rosetta(DE3)甘油菌，是收集生长在对数期的Rosetta(DE3)菌，加入含有甘油的细菌冻存液制备而成。可以直接划平板或小量、大量培养。本菌株适用于T7启动子(T7 promoter)调控目的基因表达的pET系列等原核表达质粒，特别适合带有真核基因特异性的稀有密码子的真核基因在大肠杆菌中的IPTG诱导表达，能有效提高真核基因的蛋白表达水平。
BL21缺失细胞质中的Lon蛋白酶(Lon protease)和胞外膜上的OmpT蛋白酶(OmpT protease)，能有效避免重组表达蛋白的降解，所以被广泛用作外源蛋白的表达菌株。
BL21(DE3)是BL21被λ噬菌体DE3溶原化(lysogenization)的衍生菌株，在lacUV5启动子控制下可表达噬菌体T7 RNA聚合酶(相关基因序列已经整合到细菌染色体中)。IPTG可以诱导BL21(DE3)菌株中T7 RNA聚合酶的高表达，因此BL21(DE3)菌株适合受T7启动子(T7 promoter)调控的目的基因通过IPTG诱导表达。常见的pET系列原核表达载体中目的基因的表达都是受T7启动子调控的，因此都适合用BL21(DE3)作为宿主菌。
Rosetta是大肠杆菌BL21(DE3)的衍生菌株，含有一个氯霉素抗性基因的质粒，该质粒可转录产生识别6种大肠杆菌的稀有密码子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA)的tRNA(这些tRNA是由它们天然的promoter驱动转录的)，由此Rosetta能够大大提高带有真核基因特异的稀有密码子的真核基因在大肠杆菌中的表达水平。
Rosetta(DE3)是Rosetta被λ噬菌体DE3溶原化的菌株，在lacUV5启动子控制下可表达噬菌体T7 RNA聚合酶，因此其适合通过IPTG诱导的、克隆到pET系列载体中的、带有对于大肠杆菌而言是稀有密码子的真核基因的表达。
Rosetta(DE3)基因型：F- ompT hsdSB (rB- mB- ) gal dcm (DE3) pRARE (CamR ).
Rosetta(DE3)菌株核酸酶表达水平较高，在利用其进行被转化质粒提取时，为充分避免核酸酶的影响，可使用碧云天生产的质粒小量抽提试剂盒(通用型) (D0007S或D0007M)、质中量抽提试剂盒(通用型) (D0020)或质粒大量抽提试剂盒(通用型) (D0028)进行质粒抽提。
本菌株可以使用常规的LB培养基或SOC培养基进行培养。
保存条件：
-20℃保存，至少3个月有效。-80℃可以长期保存。
注意事项：
使用本甘油菌时可以不必完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加细菌的活力会逐渐下降。在没有结冻的情况下，菌体会逐渐沉淀至管底，请务必注意适当混匀后使用。
为保证菌种纯正，避免其它细菌污染，尽量先划平板然后再挑单克隆菌落进行后续操作。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验【专题讨论】原核表达秘笈之宿主菌株的选择！（接原原核表达研究者关心的10个问题贴）
的生产任务”——因为很难亲眼观察微观世界中表达是如何进行的，当出现问题时，我们需要经验判断问题所在。宿主细胞对原核表达可能会产生哪些影响呢？ 知其然还要知其所以然。比如，菌株内源的蛋白酶过多，可能会造成外源表达产物的不稳定，所以一些蛋白酶缺陷型菌株往往成为理想的起始表达菌株。堪称经典的BL21系列就是lon和ompT蛋白酶缺陷型，也是我们非常熟悉的表达菌株。大名鼎鼎的BL21(DE3)融源菌则是添加T7聚合酶基因，为T7表达系统而设计。 真核细胞偏爱的密码子和原核系统有不同，因此，在用原核系统
和 Origami 宿主菌的优点于一体。 TrxB 和 gor 突变可分别用卡那霉素和四环素选择，因此该菌株建议用于带氨苄抗性标记 bla 的 pET 质粒。 Rosetta 宿主菌从 BL21 衍生而来，可增强带有大肠杆菌稀有密码子的真核蛋白的表达。该菌株通过一个相容性氯霉素抗性质粒补充密码子 AUA 、 AGG 、 AGA 、 CUA 、 CCC 和 GGA 的 tRNAs 。这样 Rosetta 菌株提供了“万能”的翻译，从而避免因大肠杆菌密码子使用频率导致的表达限制。 tRNA 基因
产物，使得表达产物量呈现IPTG浓度依赖性。（四环素敏感）在决定试用这些名字古怪的菌株时，有几个小Tips要注意的，一个是不同菌株有时已经携带某个质粒或者已经具有某种抗生素抗性，要注意自己的表达质粒是否能与之兼容。比如Rosetta 2 已经携带有氯霉素抗性质粒，不能再用氯霉素筛选等等。现象 可能原因 改进方案 建议菌株 无蛋白表达E. coli 的密码子偏移性补充稀有密码子的tRNA；将稀有密码子突变为普通大肠杆菌密码子Rosetta 2Rosetta-gami 2Rosetta-gami
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