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- 上海莼试
- CS-01Y76774
- 国产
- 2025年07月08日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
60
- 英文名：
Phentolamine-d4 (hydrochloride)
- CAS号：
1346599-65-2
- 供应商：
上海莼试
- 保存条件：
Store at -20°C
- 规格：
1mg
| 产品名称 | Phentolamine-d4 (hydrochloride) | 产品货号 | CS-01Y76774 |
| 规格 | 1mg | CAS号 | 1346599-65-2 |
| 含量 | >99.00% | 分子式 | C17H15D4N3O.HCl |
| 分子量 | 321.8 | 用途 | 仅供科研研究使用 |
Phentolamine-d4 (hydrochloride)规格：1mg
CAS：1346599-65-2
别名：N/A
化学名：N/A
分子式：C17H15D4N3O.HCl
分子量：321.8
溶解度：DMSO: slightly soluble,Methanol: slightly soluble
储存条件：Store at -20°C
General tips：For obtaining a higher solubility , please warm the tube at 37 ℃ and shake it in the ultrasonic bath for a while.
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产品描述:
Phentolamine-d4 is intended for use as an internal standard for the quantification of phentolamine by GC- or LC-MS. Phentolamine is a reversible antagonist of α-adrenergic receptors, non-specifically binding all α1- and α2-adrenoceptors with nanomolar affinities.1,2,3,4 Formulations containing phentolamine have been used in the treatment of hypertensive emergencies, as well as chronic and emergent pain.|1. Lomasney, J.W., Cotecchia, S., Lorenz, W., et al. Molecular cloning and expression of the cDNA for the α1A-adrenergic receptor. The gene for which is located on human chromosome 5. J. Biol. Chem. 266(10), 6365-6369 (1991).|2. Millan, M.J., Newman-Tancredi, A., Audinot, V., et al. Agonist and antagonist actions of yohimbine as compared to fluparoxan at α2-adrenergic receptors (AR)s, serotonin (5-HT)1A, 5-HT1B, 5-HT1D and dopamine D2 and D3 receptors. Significance for the modulation of frontocortical monoaminergic transmission and depressive states. Synapse 35(2), 79-95 (2000).|3. O'Rourke, M.F., Iversen, L.J., Lomasney, J.W., et al. Species orthologs of the Alpha-2A adrenergic receptor: The pharmacological properties of the bovine and rat receptors differ from the human and porcine receptors. J. Pharmacol. Exp. Ther. 271(2), 735-740 (1994).|4. Richelson, E., and Nelson, A. Antagonism by antidepressants of neurotransmitter receptors of normal human brain in vitro. J. Pharmacol. Exp. Ther. 230(1), 94-102 (1984).
使用方法:
1. 常用筛选浓度
注意：用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve)，即剂量反应性曲线，来确定最佳筛选浓度。
一般而言，哺乳动物细胞50-500μg/mL;细菌/植物细胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 杀灭曲线的建立
注意：为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素浓度，可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现，至少选择5个浓度。
1) 第一天：未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2培养过夜;注：对于需要更高密度来检测活力的细胞，可增加接种量。
2) 根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml，然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。
3) 第二天：替换旧的培养基，换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。
4) 接下来每3-4天更换新的含药物培养基。
5) 按照固定的周期(如每2天)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数(通常是7-10天)内能够杀死绝大多数细胞的浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。
3. 稳定转染细胞的筛选
1) 转染48h后，用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞(直接传代或者稀释后传代)。
注意：细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤。则当细胞过于稠密，其效率会降低。为了得到较好的筛选效果，最好将细胞稀释至丰度不超过25%
2) 每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。
3) 筛选7天后观察并评估细胞克隆(集落)的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间，这取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果。
4) 挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
5) 之后更换正常培养基培养即可。
公司正在出售的产品:
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蛋白酶抑制剂混合物实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::yi戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的yi戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::yi戊醇(25:24:1)抽提两次,:yi戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
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文献和实验Guanidine Hydrochloride Purification of Proteins From SDS
Pepstatin A (2.0 mg/ml)10 ml Leupeptin (1.0 mg/ml)10 ml Aprotinin (5.0 mg/ml)(Protease Inhibitor Cocktail Sigma #P8340)Denaturation Buffer6 M guanidine hydrochloride 57.3 g G-HCl20 mM Hepes 7.9 2 ml 1M Hepes pH 7.910 mM KCl 0.074 g KCl0.5 mM DTT 100 ml 0.5 M
Guanidine Hydrochloride Purification of Proteins From SDS PAGE
(Sigma #P7626) 10 ml Pepstatin A (2.0 mg/ml) 10 ml Leupeptin (1.0 mg/ml) 10 ml Aprotinin (5.0 mg/ml) (Protease Inhibitor Cocktail Sigma #P8340) Denaturation Buffer 6 M guanidine hydrochloride 57.3 g G-HCl 20 mM Hepes 7.9 2 ml 1M Hepes pH 7.9 10 mM
总蛋白（包括质膜和细胞器膜蛋白），但费时费力。目前，有一种最新型有效的膜蛋白提取工具，并具有高纯度、高特异性、高载量温和提取的优点。是基于1980年科学家在牛眼视网膜中发现的一种命名为Rho1D4的氨基酸序列以及其对应的抗体来作为亲和标签纯化膜蛋白取得了非常好的效果，将Rho1D4抗体链接在琼脂糖或磁珠上，用于亲和层析带有Rho1D4标签的膜蛋白，能近乎完美的解决这些研究难题。1） 什么是Rho1D4?Rho1D4是指在牛眼视网膜细胞内的牛视紫红质C端的最后九位氨基酸。Rho1D4得名于与该序列
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