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上海经科化学科技有限公司
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5µg
pLenti-TLR3-sgRNA (TLR3基因敲除质粒)是一种在动物细胞中可以同时表达Cas9、目的基因的sgRNA和puromycin抗性基因的质粒。用于在动物细胞中直接基于CRISPR/Cas9技术敲除目的基因,或者通过包装慢病毒后基于CRISPR/Cas9技术敲除目的基因。本质粒中sgRNA的有效性已经通过T7EI法的验证。
本质粒在细菌中为Amp抗性,全长约13,000bp。本质粒的关键图谱信息请参考图1。本质粒可直接转染细胞用于目的基因的CRISPR/Cas9敲除,以及通过puromycin筛选稳定细胞株;也可以与pMDLg、Rev及VSV-g共转HEK293T细胞进行重组慢病毒(lentivirus)的包装,然后再用于感染细胞或组织并进行目的基因的CRISPR/Cas9敲除。

图1. 表达sgRNA、Cas9和puromycin抗性的pLenti-sgRNA质粒关键图谱信息。
本质粒中的sgRNA基于碧云天研发的CRISPR/Cas9 sgRNA快速筛选和验证体系获得,sgRNA的有效性已经通过T7EI法验证。
本质粒用于实验时,建议同时选购无任何靶向的对照质粒pLenti-Control-sgRNA (L00011)或靶向GFP的对照质粒pLenti-GFP-sgRNA (L00013)。
碧云天同时提供基于CRISPR/Cas9技术的TLR3基因敲除的质粒(L31605 pLenti-TLR3-sgRNA)、慢病毒(L31606 TLR3 Knockout Lentivirus)、HEK293T细胞(L31607 TLR3 Knockout HEK293T Cells)、HEK293T敲除细胞的RIPA裂解液(L31608 TLR3 Knockout HEK293T RIPA Lysate)、HEK293T敲除细胞的Trizol裂解液(L31609 TLR3 Knockout HEK293T Trizol Lysate)等产品,具体请在碧云天网站查询或在本产品网页点击相应产品。
TLR3基因的基本信息如下:
| Species | Gene Symbol | Gene ID | GenBank Accession | Transcript |
| Human | TLR3 | 7098 | BC096333 | NM_003265 |
| About the gene | |
| Official Symbol | TLR3 |
| Previous Symbol | - |
| Official Full Name | toll like receptor 3 |
| Synonyms | CD283 |
| Location | 4q35.1 |
| Gene Type | protein-coding gene |
| Uniprot ID | O15455 |
| Pathway/Library | others |
| Gene Summary | The protein encoded by this gene is a member of the Toll-like receptor (TLR) family which plays a fundamental role in pathogen recognition and activation of innate immunity. TLRs are highly conserved from Drosophila to humans and share structural and functional similarities. They recognize pathogen-associated molecular patterns (PAMPs) that are expressed on infectious agents, and mediate the production of cytokines necessary for the development of effective immunity. The various TLRs exhibit different patterns of expression. This receptor is most abundantly expressed in placenta and pancreas, and is restricted to the dendritic subpopulation of the leukocytes. It recognizes dsRNA associated with viral infection, and induces the activation of NF-kappaB and the production of type I interferons. It may thus play a role in host defense against viruses. Use of alternative polyadenylation sites to generate different length transcripts has been noted for this gene. |
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文献和实验CRISPR/Cas9 基因敲除实验-- sgRNA 及引物设计
前期记录先确定目标基因CRISPR/Cas9 基因敲除实验 -- 确定目标基因然后对目的基因进行背景调查CRISPR/Cas9 基因敲除实验-- 目标基因背景调查设计 sgRNA 及引物CRISPR-Cas9 基因敲除 sgRNA 设计CRISPR-Cas9 基因敲除 sgRNA 设计好之后对前期文章的补充:设计 sgRNA 之后,需要对结果进行判断:但为什么 0.7044 分数的哪一个没有选,我也不知道为什么,总感觉他们的顺序不是随意的排的。或许有人能解答一下为什么。顺手把设计工具的解说放上
最近 CRISPR/Cas9 基因敲除技术可谓风靡全世界的实验室,CRISPR 被称为规律成簇间隔短回文重复,其实际上就是一种基因编辑器,是细菌用以保护自身对抗病毒的一个系统。后来,研究人员发现,它似乎是一种精确的万能基因武器,可以用来删除、添加、激活或抑制其他生物体的目标基因。由于其相对于前几代基因敲除技术而言更为简便高效。所以一经问世便受到科研界的热捧。利用 Cas9 质粒建立 knock-out 细胞系实验过程主要有以下几步:1. 确定待敲除基因的靶位点;2. 设计识别靶位点识别的一对
的研究成果在临床中得以应用。 研究思路研究结果 1. TLR3缺失抑制肺预转移微环境形成以及癌细胞转移 研究人员为了对TLR3,TLR4以及TLR9这些TLRs有总体的了解,对基因敲除的小鼠和野生型小鼠进行了Tlr3,Tlr4以及Tlr9的Lewis肺癌 (LLC) 或者B16/F10黑素瘤细胞接种,随后进行表型观察。结果发现,Tlr3小鼠相比较野生型,癌细胞扩散速度较慢,Tlr3小鼠生存时间也相比而言更加长。对微环境有关基因,如Bv8(Prok2),S100a8,S100
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