pNFκB-TA-GLuc-Dura (报告基因质粒)

产品简介：
pNFκB-TA-GLuc-Dura (报告基因质粒)是碧云天自行研发的用于检测NFκB转录活性水平的报告基因质粒。 pNFκB-TA-GLuc-Dura是以碧云天的pGLuc-Dura-TA质粒为模板，在其多克隆位点插入了多个NFκB结合位点，可以高灵敏度地检测NFκB的激活水平。

pGLuc-Dura-TA (报告基因质粒)是碧云天自行研发的用于在哺乳动物细胞中进行分泌型、高稳定性、非ATP依赖的Gaussia-Dura Luciferase (Gluc-Dura)萤光素酶报告基因检测的新一代质粒。该报告基因质粒在pGL6-TA (D2105)的基础上进行了改造，使用了蛋白表达水平更高、萤光更稳定的突变型(mutant, Mut)的Gaussia-Dura Luciferase萤光素酶报告基因对原firefly luciferase进行了替换。同时该质粒也延续了pGL6-TA的优势，即与Promega pGL3系列质粒相比，对整个质粒中所有可以被预测出的可能的转录因子结合位点全部进行了适当的突变处理，在保持原有功能不变的情况下，使各种转录因子在质粒上的非特异性结合降到最低。

Gaussia Luciferase是分离于夏威夷水域的一种大型海洋桡脚类(Copepod)动物(Gaussia princeps)的新型萤光素酶。Gaussia Luciferase为单条肽链的单体酶，其分子量较小(20kD)，且具有分泌性信号肽，可通过内质网分泌到细胞外。因此在使用Gaussia Luciferase的报告基因载体转染哺乳动物细胞进行表达时，无需裂解细胞，可直接使用细胞培养基上清进行萤光素酶活性的实时检测(当然也可以进行细胞裂解以分析细胞裂解中的萤光素酶活性)。

Gaussia Luciferase萤光素酶催化底物腔肠素的氧化反应并且发光(480nm)。与其他萤光素酶相比，使用Gaussia Luciferase作为报告基因有更多的优势：分泌型萤光素酶，可直接取上清检测，无须裂解细胞；发光强度高，是其它萤光素酶的1000倍；反应无须ATP，不受ATP影响；稳定性高，对温度、pH值等耐受性强。

与野生型Gaussia Luciferase相比，突变型Gaussia-Dura Luciferase在哺乳动物细胞中进行表达时，不仅保留了Gaussia Luciferase的优势和特点，还具有更高的蛋白表达水平和更好的萤光稳定性。

萤光素、萤光素酶、萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶也经常被称作荧光素、荧光素酶、萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶。

pNFκB-TA-GLuc-Dura质粒的主要信息如下：

Feature Nucleotide	Position
NFκB response element (κB)	26-65
Minimal TA promoter (pTA)	88-110
GLuc (MT) reporter gene	152-709
SV40 late poly (A) signal	744-965
SV40 early enhancer/promoter	1013-1431
Synthetic neomycin phosphotransferase (Neor) coding region	1456-2250
Synthetic poly (A) signal	2275-2323
Reporter Vector primer 4 (RVprimer4) binding region	2390-2409
ColE1-derived plasmid replication origin	2647
Synthetic Beta-lactamase (Ampr) coding region	3438-4298
Synthetic poly (A) signal/transcriptional pause site	4403-4556
Reporter Vector primer 3 (RVprimer3) binding region	4505-4524

pNFκB-TA-GLuc-Dura质粒(4556bp)的图谱如下：

pNFκB-TA-GLuc-Dura的多克隆位点的详细图谱见说明书

pNFκB-TA-GLuc-Dura中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pNFκB-TA-GLuc-Dura)包括：

AatII	AclI	AflII	AscI	AseI	AsiSI	AvaI
BmgBI	BsaAI	BsaI	BsiWI	BsoBI	BspEI	BsrGI
BssHII	CspCI	DraIII	Eco53kI	EcoRI	EcoRV	MluI
NdeI	PacI	PaeR7I	PflFI	PflMI	PmeI	PmlI
PspXI	RsrII	SacI	SbfI	SmaI	SnaBI	SrfI
SwaI	TspMI	Tth111I	XcmI	XhoI	XmaI	ZraI

pNFκB-TA-GLuc-Dura中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pNFκB-TA-GLuc-Dura)包括：

Acc65I	G`GTAC,C	14	BstZ17I	GTA|TAC	4029
Acc65I	G`GTAC,C	14	BstZ17I	GTA|TAC	4021
AflIII	A`CRYG,T	2589	Bsu36I	CC`TNA,GG	3867
AgeI	A`CCGG,T	2260	EcoNI	CCTNN`N,NNAGG	1930
AleI	CACNN|NNGTG	3431	Esp3I	CGTCTCN`NNNN,	4353
ApaI	G,GGCC`C	1526	FspI	TGC|GCA	1014
BaeI	,(N)5`(N)10ACNNNNGTAYC(N)7,(N)5`	1656	HindIII	A`AGCT,T	77
BamHI	G`GATC,C	976	HpaI	GTT|AAC	874
BbvCI	CC`TCA,GC	2141	KpnI	G,GTAC`C	19
BciVI	GTATCC(N)5,N`	2791	MfeI	C`AATT,G	883
BcoDI	GTCTCN`NNNN,	4353	NheI	G`CTAG,C	21
BglI	GCCN,NNN`NGGC	9	NotI	GC`GGCC,GC	3409
BglII	A`GATC,T	67	NruI	TCG|CGA	257
BmtI	G,CTAG`C	20	PciI	A`CATG,T	2589
BpmI	CTGGAG(N)14,NN`	330	PsiI	TTA|TAA	854
BsaXI	,NNN`(N)9AC(N)5CTCC(N)7,NNN`	144	PspOMI	G`GGCC,C	1526
BsmAI	GTCTCN`NNNN,	4353	PvuII	CAG|CTG	1086
BsmBI	CGTCTCN`NNNN,	4353	SfiI	GGCCN,NNN`NGGCC	5
BspHI	T`CATG,A	3309	SgrAI	CR`CCGG,YG	1672
BssSI	C`ACGA,G	2762	SpeI	A`CTAG,T	4340
BstBI	TT`CG,AA	2325	StuI	AGG|CCT	1409
BstEII	G`GTNAC,C	3436	XmnI	GAANN|NNTTC	413
BstXI	CCAN,NNNN`NTGG	3429

pNFκB-TA-GLuc-Dura质粒可使用的测序引物序列如下：

RVprimer3 (4505-4524): CTA GCA AAA TAG GCT GTC CC

pNFκB-TA-GLuc-Dura的全序列信息：D2209 pNFκB-TA-GLuc-Dura(报告基因质粒).txt。

保存条件：

-20℃保存。

注意事项：

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。