- ￥888 - 1169
- 碧云天（beyotime）
- 国产
- D2789
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
零下20℃
- 保质期：
至少一年有效
- 库存：
现货
- 供应商：
上海经科化学科技有限公司
- 规格：
1μg/100μg
| 规格： | 1μg | 产品价格： | ￥888.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 100μg | 产品价格： | ￥1169.0 |
产品简介：
pCMV-N-Flag-Pur是碧云天自行研发的用于在哺乳动物细胞中表达N端带有Flag标签(Flag Tag, DYKDDDDK)的目的蛋白的表达质粒。该质粒含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达；在多克隆位点的5′端含有一个编码Flag标签的序列，可以表达含有Flag标签的融合蛋白，因此可以方便地使用抗Flag的抗体来识别目的蛋白，从而有利于目的蛋白检测和分离纯化。
pCMV-N-Flag-Pur质粒为氨苄青霉素抗性和嘌呤霉素(Puromycin)抗性。可利用其氨苄青霉素抗性转化大肠杆菌后筛选阳性菌，而在转染哺乳动物细胞后，可利用其Puromycin抗性筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。Puromycin (ST551)可以从碧云天购买。
Puromycin是来源于白黑链霉菌的一种氨基苷类抗生素，可通过打乱核糖体上的肽转运，造成翻译过程中不成熟终止，从而抑制蛋白质合成，抑制或杀死细胞。链霉菌(Streptomyces alboniger)来源的pac基因所编码的嘌呤霉素N-乙酰转移酶 (Puromycin N-acetyl-tranferase)可以催化Puromycin发生乙酰化修饰而失活，使细胞对Puromycin产生抗性。因此，Puromycin可用来筛选成功转染携带Puromycin抗性基因质粒的原核或真核细胞。
Puromycin是一种强效翻译抑制剂，作用迅速。一般2天内可以杀死99%的不表达pac基因的细胞，通常可在不到一周的时间内即可筛选到具有Puromycin抗性的稳定哺乳动物细胞系。推荐工作浓度范围为0.5-5μg/ml，实际使用时应针对不同的细胞系测试Puromycin的浓度梯度，以确定最佳使用浓度。
pCMV-N-Flag-Pur质粒(5160bp)的图谱如下：
pCMV-N-Flag-Pur质粒的主要信息如下：
| Feature Nucleotide | Position |
| Ampicillin resistance ORF | 63-923 |
| CMV promoter | 1405-1608 |
| T3 promoter and T3 primer binding site | 1654-1672 |
| Flag tag | 1713-1736 |
| Multiple cloning site (XmaI-ApaI) | 1739-1811 |
| T7 promoter and T7 primer binding site | 1857-1875 |
| SV40 polyA signal | 2149-2270 |
| f1 origin of ss-DNA replication | 2277-2732 |
| SV40 promoter | 2865-3222 |
| Puromycin resistance ORF | 3257-3856 |
| HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal | 4088-4135 |
| pUC origin | 4464-5052 |
pCMV-N-Flag-Pur的多克隆位点的详细图谱见说明书
pCMV-N-Flag-Pur中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-N-Flag-Pur)包括：
| Afe I | Afl II | Age I | Asc I | AsiS I | Bae I |
| BbsI | BbvC I | Blp I | BmgB I | Bsg I | BspQ I |
| BsrG I | BstZ17 I | EcoN I | Fse I | Nru I | PflM I |
| Pme I | Pml I | PpuM I | PshA I | PspX I | Sap I |
| Sbf I | SgrA I | Swa I | Xcm I |
pCMV-N-Flag-Pur中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-N-Flag-Pur once)包括：
| AccI | GT`MK,AC | 1777 | MfeI | C`AATT,G | 2135 |
| AhdI | GACNN,N`NNGTC | 135 | MluI | A`CGCG,T | 2271 |
| AleI | CACNN|NNGTG | 1695 | MscI | TGG|CCA | 3632 |
| ApaI | G,GGCC`C | 1806 | NdeI | CA`TA,TG | 1274 |
| BamHI | G`GATC,C | 1746 | NheI | G`CTAG,C | 1631 |
| BclI | T`GATC,A | 2042 | NotI | GC`GGCC,GC | 1702 |
| BfuAI | ACCTGCNNNN`NNNN | 3908 | PaeR7I | C`TCGA,G | 1788 |
| BglII | A`GATC,T | 1782 | PciI | A`CATG,T | 5108 |
| BmtI | G,CTAG`C | 1631 | PflFI | GACN`N,NGTC | 3299 |
| Bpu10I | CC`TNA,GC | 3853 | PspOMI | G`GGCC,C | 1806 |
| BseRI | GAGGAG(N)8,NN | 3201 | PstI | C,TGCA`G | 1758 |
| BsiWI | C`GTAC,G | 3313 | PvuII | CAG|CTG | 2883 |
| BsmBI | CGTCTCN`NNNN | 3649 | RsrII | CG`GWC,CG | 3373 |
| BspDI | AT`CG,AT | 3225 | SacI | G,AGCT`C | 1685 |
| BspEI | T`CCGG,A | 3370 | SalI | G`TCGA,C | 1776 |
| BspMI | ACCTGCNNNN`NNNN | 3908 | ScaI | AGT|ACT | 616 |
| BssHII | G`CGCG,C | 3712 | SfiI | GGCCN,NNN`NGGCC | 3157 |
| BstBI | TT`CG,AA | 3872 | SmaI | CCC|GGG | 1741 |
| BstEII | G`GTNAC,C | 3391 | SnaBI | TAC|GTA | 1380 |
| BstXI | CCAN,NNNN`NTGG | 1693 | SpeI | A`CTAG,T | 1800 |
| ClaI | AT`CG,AT | 3225 | SrfI | GCCC|GGGC | 1741 |
| CspCI | NN`(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN` | 1414 | TspMI | C`CCGG,G | 1739 |
| Eco53kI | GAG|CTC | 1687 | Tth111I | GACN`N,NGTC | 3299 |
| EcoRI | G`AATT,C | 1764 | XbaI | T`CTAG,A | 1794 |
| EcoRV | GAT|ATC | 1772 | XhoI | C`TCGA,G | 1788 |
| Esp3I | CGTCTCN`NNNN | 3649 | XmaI | C`CCGG,G | 1739 |
| HindIII | A`AGCT,T | 1752 | XmnI | GAANN|NNTTC | 735 |
| HpaI | GTT|AAC | 2148 |
pCMV-N-Flag-Pur质粒中对插入片段进行测序时，推荐使用的正向测序引物T3和反向测序引物T7的序列如下：
T3 primer (1654-1672): 5' AATTAACCCTCACTAAAGG 3'
T7 primer (1857-1875): 5' TAATACGACTCACTATAGG 3'
pCMV-N-Flag-Pur的全序列信息:D2789 pCMV-N-Flag-Pur-seq.txt
保存条件：
-20℃保存。
注意事项：
本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验【求助】克隆100个已知序列的基因于带有绿色荧光蛋白的载体中需要多少时间和经费？
个和12,000个，其中11,000个克隆的表达已经通过Western Blot的验证。这些克隆以2种形式提供：一种是在表达的蛋白C末端带Myc-DDK(即FLAG)标签，一种是带GFP标签。这些cDNA克隆均构建于pCMV6入门载体上，可方便转换至其他目的载体。 按照其网页上的促销价：900RMB/clone × 100 ＝ 9万RMB， 直接买，不用等时间，就可搞定，批量买估计还可以讲价，关键的是品质有保证。 注：非公司托儿，因前段时间帮朋友筹划项目专门研究
pCF-T M13F M13R pCI T7（17Base） 此载体无反向引物 pCI-neo T7（17Base） T3 pCMS-EGFP T7 T3 pCMV-3Tag-4A T3 /PFLAG-CMV-F T7 pCMV5 pCMV5F pCMV5R pCMV5-Flag pCMV5F pCMV5R pCMV-MYC/HA pCMV-F pCMV-R pCMV-Sport M13F/T7 SP6/M13R pCMV-Tag(KAN+) T3 T7 pCR2.1-TOPO
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