Recombinant Human Cytokeratin

货号	BJ-DB2419	规格	50μg、200ug、1mg
表达区间	2-424	种属	Human
宿主	E.Coli	分子量	46.4 kDa
应用范围	Western Blot, ELISA	标签	N-terminal His Tag

纯度：Greater than 95% as determined by SDS-PAGE
应用：Western Blot, ELISA
性状：Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4
溶解方法：Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex
存储：-20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution
别名：CD20, CK 20, CK-20, CK20, Cytokeratin-20, Cytokeratin20, K1C20_HUMAN, K20, KA20, Keratin, Keratin 20, keratin 20, type I, keratin 21, rat, homolog of, Keratin type I cytoskeletal 20, Keratin-20, Keratin20, KRT 20, KRT 21, KRT20, KRT21, MGC35423, OTTHUMP00000164518, Protein IT, type I cytoskeletal 20
基本原则:

1. 低温
保存蛋白质时，确保在低温条件下至关重要。低温意味着较低的能量水平，有助于减缓蛋白质分子内部的热运动，减少键的断裂可能性。此外，在低温下，微生物繁殖减缓，潜在的蛋白酶活性降低，从而有助于维持蛋白质的活性。
2. 无菌
在进行蛋白质实验操作时，务必佩戴手套。尽管实验室戴手套通常是为了保护实验者自身，但在生化实验中，蛋白质是我们需要保护的主体。我们皮肤上存在一些蛋白酶，可能会降解蛋白样品。此外，皮肤上的其他化学物质也可能污染蛋白样品。为了防止细菌生长，最好将蛋白质保存在经过灭菌处理的容器中。
3. 浓度
为了提高蛋白质的稳定性，建议以较高浓度保存重组蛋白质，最好保持在1mg/ml以上。高浓度有助于防止蛋白质分子附着在塑料或玻璃管壁上。不容忽视的是，疏水性蛋白质容易附着在管壁上。
4. 分装
蛋白质需要冷冻保存，但在实验中常在室温或更高温度使用。反复冻融过程中产生的冰晶会损害蛋白质的结构和构象。为减少冻融次数，建议将纯化后的蛋白质进行分装保存，每次使用前融化所需量，以确保蛋白质样品经历单次冻融。
5. 速冻／速融
在蛋白质溶冷冻时，为了减少蛋白质分子在高盐度或pH条件下的曝露时间，可选择速冻方法。速冻可通过液氮实现。速冻后，蛋白质可以存放在-20°C或-80°C中，同样，蛋白质的快速融化也是至关重要的，可在温水中进行。
6. 避免震荡
震荡产生的剪切力可能对蛋白质造成破坏。在震荡时，液体中会生成气泡，导致氧气进入，使蛋白质处于氧化环境中。由于蛋白质中的半胱氨酸容易被氧化为胱氨酸，这一过程可能破坏蛋白质的活性。
7. 添加剂
为了确保蛋白质的稳定性，需要将其保存在适当的缓冲液中，并添加一些保护剂。例如，在-20°C保存时，可添加10%-50%的甘油防止结冰，避免冻融过程。此外，还可添加防腐剂抑制细菌生长，或蛋白酶抑制剂（PMSF）以防止蛋白酶对蛋白质的破坏。同时，添加一些还原剂如DTT可防止蛋白质氧化。在选择添加剂时，务必确保其不会影响蛋白的活性。

操作步骤：

（一）获得目的基因
1、通过PCR方法：以含目的基因的克隆质粒为模板，按基因序列设计一对引物（在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点），PCR循环获得所需基因片段。
2、通过RT-PCR方法：用TRIzol法从细胞或组织中提取总RNA，以mRNA为模板，逆转录形成cDNA第一链，以逆转录产物为模板进行PCR循环获得产物。
3、人工合成法：依照检索到的目的基因序列，设计合成相互重叠的单链寡核苷酸，再通过重叠延伸PCR法拼接出全长，这种方法无需模板，是目前常用的获取基因的手段之一。
（二）构建重组表达载体
1、载体酶切：将表达质粒用限制性内切酶（同引物的酶切位点）进行双酶切，酶切产物行琼脂糖电泳后，用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。
2、PCR产物双酶切后回收，在T4DNA连接酶作用下连接入载体。
（三）获得含重组表达质粒的表达菌种
1、将连接产物转化大肠杆菌，根据重组载体的标志（抗Amp或蓝白斑）作筛选，挑取单斑，碱裂解法小量抽提质粒，双酶切初步鉴定。
2、测序验证目的基因的插入方向及阅读框架均正确，进入下步操作。否则应筛选更多克隆，重复亚克隆或亚克隆至不同酶切位点。
3、以此重组质粒DNA转化表达宿主菌的感受态细胞。
（四）诱导表达
1、挑取含重组质粒的菌体单斑至2ml LB（含Amp50μg/ml）中37℃过夜培养。
2、按1∶50比例稀释过夜菌，一般将1ml菌加入到含50mlLB培养基的300ml培养瓶中，37℃震荡培养至OD600 ≌0.4-1.0（最好0.6，大约需3hr）。
3、取部分液体作为未诱导的对照组，余下的加入IPTG诱导剂至终浓度0.4mM作为实验组，两组继续37℃震荡培养3hr。
4、分别取菌体1ml，离心12000g×30s收获沉淀，用100μl 1%SDS重悬，混匀，70℃10min。
5、离心12000g×1min，取上清作为样品，可做SDS-PAGE等分析。

下列是公司正在出售的产品：

T细胞急性淋巴母细胞白血病相关抗原1抗体  TALLA-1  SHP099
踝蛋白抗体  Talin  Cefotetan (sodium salt)
T细胞急性淋巴细胞白血病蛋白1抗体  Tal1  Seviteronel
神经元蛋白22抗体  TAGLN3  Davunetide
瞬时表达轴索糖蛋白1抗体  TAG1  FK1052 hydrochloride
BCL2 like 14  Bcl2样凋亡蛋白14抗体  Glabrene
Bcl 2 like protein 9  Bcl2样凋亡蛋白9抗体  Ginsenoside Rh4
BAG3  Bcl2抑凋亡蛋白Bag3抗体  GlyRS-IN-1
Bcl-2  Bcl-2重组兔单克隆抗体  Glycoursodeoxycholic acid (Ursodeoxycholylglycine)
PTRH2  Bcl-2转录抑制因子1抗体  Glycodeoxycholic Acid
Rofecoxib-d5  味觉2型受体蛋白家族49抗体  TAS2R49
Rotigotine hydrochloride  味觉2受体成员41抗体  T2R41
Resolvin D1-d5  味觉2受体成员13抗体  T2R13
Rhodiosin  未知糖基化转移酶AER61抗体  AER61
Rilmenidine-d4  未分化胚胎干细胞转录因子1抗体  UTF1
Recombinant Human Cytokeratin 20TOMM20  线粒体外膜受体Tom20抗体  6β-hydroxy Prednisolone
ABCA1  腺苷三磷酸结合盒转运体A1抗体  [D-Ala2]-Deltorphin II
APCDD1  腺瘤性息肉调节蛋白抗体  DPC AJ1951
ATXN3L  小脑脊髓共济失调蛋白3抗体  SNC 162
CCAP  心动加速蛋白多肽抗体  Ghrelin (rat) (trifluoroacetate salt)