CCK-8检测

CCK-8的优点
产生的甲瓒产物是水溶性的，无需换液
不需要放射性同位素和有机溶剂，对细胞的毒性小
CCK-8细胞活性检测试剂毋需预制，即开即用
灵敏度高，线性范围宽，数据可靠，重现性好
操作简便，省时省力
适合于高通量药物筛选
CCK-8的缺点：
与MTT法相比，CCK-8的价格比较贵
CCK-8试剂的颜色为淡红色，与含酚红的培养基颜色接近，操作过程中容易漏加或多加
一、实验一：细胞增殖分析
1）制备细胞悬液，计数。
2）在96孔板中接种细胞悬液，每孔约100μl，同样的样本可做3个重复。
3）将培养板放入培养箱中预培养一段时间（37℃, 5%CO2），细胞贴壁需要大约2-4h，如果是悬浮细胞，该步骤可以省去。
4）每孔各加入10μl CCK-8溶液，由于加入的CCK-8量比较少，可能会因试剂沾在孔壁上而带来误差，建议在加完试剂后轻轻晃动培养板以帮助混匀，或者直接配置含10%CCK-8的培养基，以换液的形式加入。另外注意，加样的过程中尽量不要产生气泡。
5）将培养板放入培养箱中孵育1-4h。因为细胞种类不同，形成的formazan的量也不一样，所以如果显色不够的话，可以延长培养时间，特别是血液细胞形成的formazan很少，需要较长的显色时间（5-6h）。
6）酶标仪测定450nm处的吸光值（OD）。
7）若暂时不测定OD值，可以在各孔中加入10μl 0.1 M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，室温下避光保存，这样可以保证OD值在24h内不发生变化。
二、实验二：细胞毒性分析
1）制备细胞悬液，计数。
2）在96孔板中接种细胞悬液，每孔约100μl，同样的样本可做3个重复。
3）将培养板放入培养箱中预培养一段时间（37℃, 5%CO2），细胞贴壁需要大约2-4h，如果是悬浮细胞，该步骤可以省去。
4）向培养板各孔中加入不同浓度的毒性物质（药物、化学试剂等待检测物质）。
5）将培养板放入培养箱中孵育一段时间，例如6、12、24、48h，具体时间要看待测物质的性质和细胞的敏感性。
如果待检测物质有氧化性或还原性，可在加入CCK-8之前更换新鲜培养基，以去掉待测物质的影响。如果影响比较小或者没有影响，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
6）向每孔中加入10μl CCK-8溶液，由于加入的CCK-8量比较少，可能会因试剂沾在孔壁上而带来误差，建议在加完试剂后轻轻晃动培养板以帮助混匀，或者直接配置含10%CCK-8的培养基，以换液的形式加入。另外注意，加样的过程中尽量不要产生气泡，以免影响OD值读数。
7）将培养板放入培养箱中孵育1-4h。因为细胞种类不同，形成的formazan的量也不一样，所以如果显色不够的话，可以延长培养时间，特别是血液细胞形成的formazan很少，需要较长的显色时间（5-6h）。
8）用酶标仪测定450nm处的吸光度（OD）。
9）若暂时不测定OD值，可以在各孔中加入10μl 0.1 M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，室温避光保存，这样可以保证OD值24h内不发生变化。
活力计算：
细胞活力（%）=[A(加药)-A(空白)]/[A(0加药)-A(空白)] ×100
A（加药）：具有细胞、CCK-8溶液和药物溶液的孔的OD值
A（0加药）：具有细胞、CCK-8溶液而没有药物溶液的孔的OD值
A（空白）：没有细胞的孔的OD值
细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性活力

检测平台

服务项目	服务承诺	服务周期	样本种类
病理切片、免疫组化	染色结果照片	2-3周	组织
Western blotting	胶片	1-2周	蛋白样本或组织
流式细胞服务	散点图、分析数据、设备信息等	1-2周	血样、骨髓等
细胞凋亡检测	凋亡图、数据分析		细胞
RT-PCR	扩增图	1-2周	RNA或组织
血压监测（无创式）	实时血压数据		大、小鼠

动物模型更新速度较慢，如店铺内模型为满足您的科研需求，请扫描二维码联系我们，定制专属服务动物模型