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- 碧云天（beyotime）
- 国产
- L05820
- 2025年07月19日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
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零下20℃
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至少一年有效
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现货
- 供应商：
上海经科化学科技有限公司
- 规格：
5µg
pLenti-H4C4-sgRNA (H4C4基因敲除质粒)是一种在动物细胞中可以同时表达Cas9、目的基因的sgRNA和puromycin抗性基因的质粒。用于在动物细胞中直接基于CRISPR/Cas9技术敲除目的基因，或者通过包装慢病毒后基于CRISPR/Cas9技术敲除目的基因。本质粒中sgRNA的有效性已经通过T7EI法的验证。
本质粒在细菌中为Amp抗性，全长约13,000bp。本质粒的关键图谱信息请参考图1。本质粒可直接转染细胞用于目的基因的CRISPR/Cas9敲除，以及通过puromycin筛选稳定细胞株；也可以与pMDLg、Rev及VSV-g共转HEK293T细胞进行重组慢病毒(lentivirus)的包装，然后再用于感染细胞或组织并进行目的基因的CRISPR/Cas9敲除。
图1. 表达sgRNA、Cas9和puromycin抗性的pLenti-sgRNA质粒关键图谱信息。
本质粒中的sgRNA基于碧云天研发的CRISPR/Cas9 sgRNA快速筛选和验证体系获得，sgRNA的有效性已经通过T7EI法验证。
本质粒用于实验时，建议同时选购无任何靶向的对照质粒pLenti-Control-sgRNA (L00011)或靶向GFP的对照质粒pLenti-GFP-sgRNA (L00013)。
碧云天同时提供基于CRISPR/Cas9技术的H4C4基因敲除的质粒(L05820 pLenti-H4C4-sgRNA)、慢病毒(L05821 H4C4 Knockout Lentivirus)、HEK293T细胞(L05822 H4C4 Knockout HEK293T Cells)、HEK293T敲除细胞的RIPA裂解液(L05823 H4C4 Knockout HEK293T RIPA Lysate)、HEK293T敲除细胞的Trizol裂解液(L05824 H4C4 Knockout HEK293T Trizol Lysate)等产品，具体请在碧云天网站查询或在本产品网页点击相应产品。
H4C4基因的基本信息如下：
| Species | Gene Symbol | Gene ID | GenBank Accession | Transcript |
| Human | H4C4 | 8360 | BC128104 | NM_003539 |
| About the gene | |
| Official Symbol | H4C4 |
| Previous Symbol | H4FB |
| Official Full Name | histone cluster 1 H4 family member d |
| Synonyms | H4/b |
| Location | 6p22.2 |
| Gene Type | protein_coding |
| Uniprot ID | P62805 |
| Pathway/Library | Epigenetic Regulators Related Genes Library |
| Gene Summary | Histones are basic nuclear proteins that are responsible for the nucleosome structure of the chromosomal fiber in eukaryotes. Two molecules of each of the four core histones (H2A, H2B, H3, and H4) form an octamer, around which approximately 146 bp of DNA is wrapped in repeating units, called nucleosomes. The linker histone, H1, interacts with linker DNA between nucleosomes and functions in the compaction of chromatin into higher order structures. This gene is intronless and encodes a replication-dependent histone that is a member of the histone H4 family. Transcripts from this gene lack polyA tails but instead contain a palindromic termination element. This gene is found in the large histone gene cluster on chromosome 6. |
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文献和实验CRISPR/Cas9 基因敲除实验-- sgRNA 及引物设计
前期记录先确定目标基因CRISPR/Cas9 基因敲除实验 -- 确定目标基因然后对目的基因进行背景调查CRISPR/Cas9 基因敲除实验-- 目标基因背景调查设计 sgRNA 及引物CRISPR-Cas9 基因敲除 sgRNA 设计CRISPR-Cas9 基因敲除 sgRNA 设计好之后对前期文章的补充：设计 sgRNA 之后，需要对结果进行判断：但为什么 0.7044 分数的哪一个没有选，我也不知道为什么，总感觉他们的顺序不是随意的排的。或许有人能解答一下为什么。顺手把设计工具的解说放上
最近 CRISPR/Cas9 基因敲除技术可谓风靡全世界的实验室，CRISPR 被称为规律成簇间隔短回文重复，其实际上就是一种基因编辑器，是细菌用以保护自身对抗病毒的一个系统。后来，研究人员发现，它似乎是一种精确的万能基因武器，可以用来删除、添加、激活或抑制其他生物体的目标基因。由于其相对于前几代基因敲除技术而言更为简便高效。所以一经问世便受到科研界的热捧。利用 Cas9 质粒建立 knock-out 细胞系实验过程主要有以下几步：1. 确定待敲除基因的靶位点；2. 设计识别靶位点识别的一对
CRISPR/Cas9 基因敲除实验 -- 293FT 细胞转染验证 and trouble shooting
提取质粒后验证，这部分就花了一天时间；加上打台风影响细胞复苏，耽误了 1 - 2 天，复苏细胞后隔一天立刻传代种板，第二天发现细胞稍微少了一点，又等了一天，转染后虽然是 72 h 应该收 sample，但细胞数目略少，可能提取不到足够的基因组 DNA，所以让细胞又长了一天，直到百分之 80 以上的融合度（因为我用的是 24 孔板）。基因组 DNA 提取之后立刻进行 Q5PCR，跑胶切胶回收，T7EI 酶切再跑胶，这个骚操作一天做不完，分了两天做，所以就一下子花了将近十天时间，嘤嘤嘤，这要放在其他组
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