蓝色葡聚糖，SigmaD5751-1G

葡聚糖凝胶过滤法测定蛋白质分子量方法

蛋白 图4.4 Ve / V0对log MW作图 试剂和器材 一、试剂洗脱液：0.05M Tris-HCl缓冲液(pH7.5)，0.1M KCl溶液：称取12.12g Tris，15g KCl，先用少量去离子水溶解，再加入6.67mL浓HCl，用去离子水定容至2L。 蓝色葡聚糖2000；Sephsdex G-100；N-乙酰酪氨酸乙酯饱和溶液(以洗脱液饱和)。 二、材料 牛血清白蛋白(Mr 67 000)；卵清蛋白(Mr 43 000

葡聚糖凝胶层析

。分子量大于允许进入凝胶网孔范围的物质完全被凝胶排阻，不能进入凝胶颗粒内部，阻滞作用小，随着溶剂在凝胶颗粒之间流动，因此流程短，而先流出层析柱；分子量小的物质可完全进入凝胶颗粒的网孔内，阻滞作用大，流程延长，而最后从层析柱中流出。若被分离物的分子量介于完全排阻和完全进入网孔物质的分子量之间，则在两者之间从柱中流出，由此就可以达到分离目的。 本实验以葡聚糖凝胶G—25作为固定相载体，来分离蓝色葡聚糖—2000和溴酚蓝。蓝色葡聚糖—2000分子量接近2×10 6 ， 而溴酚

层析技术概念、原理、分类（凝胶层析和离子交换层析）

等。 葡聚糖凝胶介质是由多聚葡聚糖与环氧绿丙烷交连而成。最常用的葡聚糖凝胶层析介质是Sephadex G系列，不同型号的凝胶用G表示，G代表交联度，从G10到G100。“G”后面的数字表示每10g干胶的吸水量，可根据待分离混和物分子量大小选用不同“G”值的凝胶。 2.  分离过程： 样品随洗脱液的流动下移 3.  影响凝胶柱层析的主要因素 （1）层析柱的选择与装填 层析柱的大小应根据分离样品量的多少及对分辨率的要求而定。凝胶柱填装后用肉眼观察应均匀