皮肤瘢痕模型

一、兔耳瘢痕动物模型构建

实验动物：新西兰大白兔，4月龄，雄性，体重（2.5±0.2)kg。

分组：大白兔随机分为4组，每组6只。共24只。

（1） 负载曲安奈德的丝素蛋白组

（2） 曲安奈德组

（3） 空白载体组

（4） Pbs对照组

药物配制：（待更新）

兔耳瘢痕模型：称重（需记录）、麻醉、脱毛。在无菌条件下在每只兔耳腹侧表面深达软骨膜处制作4个直径约10 mm的全层圆形创面，去除皮肤，完整去除软骨膜，保证软骨无穿透性损伤，每个兔耳制作4个创面，每只兔子8个创面。

药物注射：分别在术后3、4、5、6周分别在瘢痕的边缘四个点及中心点（共5个注射点）皮下注射，每个点注射40ul，每个创面注射200ul。

二、 观察指标：

（1）大体观察：分别在术后3、4、5、6、7周进行以下评估：

a. 每个创面拍照，记录清楚组别和创面位置

b. 超声多普勒评价瘢痕厚度和瘢痕内血流（两项指标分别记录）

c. 色差仪记录瘢痕颜色情况

d. 温哥华瘢痕量表(VSS)分值：实验者对每一个手术创面进行评分。分值越大，表明瘢痕增生越明显。

e. 瘢痕增生指数(SEI)：用测微尺测量兔耳瘢痕最高点至耳软骨表面的垂直厚度(a)、瘢痕周边正常皮肤至耳软骨表面的垂直厚度(b)，计算得出瘢痕增生指数(SEI＝a/b)。数值越大，表明瘢痕越厚。

切片染色和QPCR：分别在术后3、4、5、6、7周取材，共5个时间点，每个时间点每个组取材一只兔子，每只兔子取材8个瘢痕组织（其中3个瘢痕组织用于石蜡包埋，5个标本液氮保存）。

（2）切片染色包括：

a. 成纤维细胞数量：HE染色制成瘢痕组织切片，按Weidner计数方法在400倍视野光镜下随机计数3个视野的成纤维细胞数量，求其平均值。

b. Ⅰ、Ⅲ型胶原面密度：天狼星红染色切片，在100倍偏振光显微镜下每张切片随机计数3个视野，采用Image Pro Plus 6.0图像分析系统分别进行检测。I型胶原面密度(%)＝(红色区域面积＋黄色区域面积)/总面积×100%；Ⅲ型胶原面密度(%)＝绿色区域面积/总面积×100%。

c. CD31免疫组化，计算血管密度。

d. a-SMA免疫组化，检测计算阳性率

e. TNF-a免疫荧光，计算荧光强度

（3）QPCR：

CD31、TNF-a、TGF-b、a-SMA、bFGF、I型胶原蛋白(CO I)、llI型胶原蛋白(CO 111)、MMP-1

WB(尝试)：MMP-1、TGF-b

检测平台

服务项目	服务承诺	服务周期	样本种类
病理切片、免疫组化	染色结果照片	2-3周	组织
Western blotting	胶片	1-2周	蛋白样本或组织
流式细胞服务	散点图、分析数据、设备信息等	1-2周	血样、骨髓等
细胞凋亡检测	凋亡图、数据分析		细胞
RT-PCR	扩增图	1-2周	RNA或组织
血压监测（无创式）	实时血压数据		大、小鼠

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