肝癌动物模型

一、造模方法

（一）异位模型制作

将冻存的肝癌H22细胞株复苏，体外培养至对数期后，以生理盐水调整细胞浓度至1x107 个/mL,每只小鼠腹腔内注射0.5mL，共4只。注射7d后在无菌条件下抽出腹水，离心,去除杂质细胞，调整癌细胞浓度至1x107 个/mL备用，进行原位移植。

（一）原位模型制作

采取开腹手术直接注入肝脏法。昆明小鼠共36 只。取 5周龄小鼠，抓取固定，腹部剃毛，75%医用酒精消毒，麻醉，麻醉起效后，将小鼠四肢固定小手术台上，腹部再次消毒，取剑突下上腹部正中切口，长约1.2cm，剪开皮肤、腹白线及腹膜，压迫止血，轻轻挤压小鼠双侧腹壁，将小鼠肝左叶挤压出腹腔。(2)取无菌注射器将0.1mLH22肿瘤细胞注入左肝实质内，退出针头，轻压针眼，取烧红的铁丝轻灼针眼，防止肿瘤细胞逃逸，发生腹腔种植，将肝左叶轻轻送回腹腔。查无活动性出血，取1号丝线缝合腹壁各层，消毒，小创口贴切口黏贴，结束造模。

二、模型检测

1.模型观察:

2.定期观察荷瘤小鼠生存、活动状况及腹部体征。扪查腹部了解移植瘤形成时间、质地及大小，以小鼠腹部可触及实体性包块为成瘤标志。留取 10 只荷瘤小鼠观察其带瘤的自然生存期。

2.解剖学及病理学观察:

当小鼠出现消瘦、精神萎靡等体征时处死小鼠。开腹肉眼观察肿瘤生长部位、质地、活动度、浸润、腹水及腹腔转移情况。游标卡尺测量瘤体的长(l)、宽(w)、高(h)。固定瘤体，石蜡包埋，切片，经HE染色作常规病理检查。

3.血清学检测:

小鼠处死前，采用眼球摘除法取血，及时分离血清。ELISA法检测 AFP[5]、DCP[6]，y-GTⅡ检测用凝胶梯度电泳法分离，凡出现I、I、Ⅲ带任一条即可判定结果阳性。

检测平台

服务项目	服务承诺	服务周期	样本种类
病理切片、免疫组化	染色结果照片	2-3周	组织
Western blotting	胶片	1-2周	蛋白样本或组织
流式细胞服务	散点图、分析数据、设备信息等	1-2周	血样、骨髓等
细胞凋亡检测	凋亡图、数据分析		细胞
RT-PCR	扩增图	1-2周	RNA或组织
血压监测（无创式）	实时血压数据		大、小鼠

 

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