Recombinant Human NFYA

重组蛋白的制备涉及多个步骤，包括基因克隆、表达系统选择和蛋白纯化：
● 基因克隆：基因克隆是将目标基因导入表达载体中的过程。研究人员可以选择不同的克隆方法，如限制性酶切克隆、PCR扩增克隆等，根据需要构建目标基因的DNA序列。
● 表达系统选择：选择适合的表达系统是重组蛋白制备的关键一步。常用的表达系统包括大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞。每种表达系统都具有不同的优缺点，适用于不同类型的蛋白质表达。
5大蛋白表达系统：
商品属性：

货号	XG-DB2768	种属	Human
宿主	E.Coli	表达区间	1-318
分子量	34.9 kDa	标签	N-terminal His Tag
规格	50μg、200ug、1mg	用途	仅供科研实验

商品介绍：

别称：CAAT box DNA binding protein subunit A, CAAT box DNA-binding protein subunit A, CBF A, CBF B, CBFA, CBFB, CCAAT binding transcription factor subunit B, FLJ11236, HAP 2, HAP2, HAP2 CCAAT binding protein, NF YA, NF-YA, NFY protein chain A, NFYA, NFYA_HUMAN, NUCLEAR FACTOR BINDING TO Y BOX OF HLA GENES, Nuclear transcription factor Y, Nuclear transcription factor Y alpha  纯度 Greater than 95% by SDS-PAGE gel analyses 应用  Western Blot, ELISA 性状  Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4 溶解方法Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex 存储 -20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution

表达、纯化、复性和定量，具体步骤如下：
一、重组蛋白质的诱导表达
1. 挑取转化有质粒的单菌落， 接种于 3ml 选择性 LB 液体培养基中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养过夜。
2. 次日将培养过夜的菌液 500 μl 再接种于 10ml（1:20）选择性 LB 液体培养基 中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养至光密度（OD600=0.6）时，取 1 ml 样本作 为诱导前标本， 10000g 离心 1min 收集菌体沉淀，－20 oC 冻存备用。
3. 加入 1 mol/L IPTG 于菌液中，使 IPTG 终浓度为 1 mM ，37 oC ，250 rpm/min 振摇培养 4 ～ 5 小时。取 1 ml 样本作为诱导后标本，同上法收集菌体沉淀， -20 oC 冻存备用。
4. 将诱导前后菌体沉淀用 20 ~ 40 μl PBS（pH= 8.0）重悬， 加入等体积的 2×SDS 上样缓冲液， 煮沸加热 5min，SDS 凝胶（SDS-PAGE）电泳分离 ， 考马斯亮蓝染色 3 小时后，脱色观察结果。
5. 选取诱导成功的细菌克隆，扩大诱导规模，收集菌体沉淀，于－ 20 oC 保存，准备做下一步分析及纯化。

二、重组蛋白质的分离纯化
重组蛋白质的可溶性鉴定
1. 将按上法诱导培养后收集的菌体重悬于裂解液 1 (Lysis buffer under native conditions )中，然后在－80 oC 低温冰箱中放置 10 min。
2. 冰中解冻。
3. 在冰浴上用超声破碎仪破菌 6 次， 每次 10 sec，间歇 10 sec，电压 200-300 V。
4. 10000g，4oC，离心 20min，取上清（为溶液 A）， － 20 oC 保存； 另将沉淀用 同样裂解液 1 溶解（为溶液 B），同样 －20 oC 保存，供后继分析使用。
5. 将上述 A、B 溶液和诱导前后的细菌进行 SDS-PAGE 电泳， 考马斯亮蓝染色，分析重组蛋白质的溶解性。如果诱导表达的蛋白质位于 A 溶液中， 则为
可溶性蛋白；如果是在 B 溶液中，则为非可溶蛋白。
​​​​​ 公司正在出售的产品：
16010-142 1000ml  incubation media 16010-142 1000ml    钙非依赖性0脂酶A2(iPLA2)重组蛋白 Recombinant Phospholipase A2, Calcium Independent (iPLA2)
马血清 供体动物的EIA检测呈阴性 新西兰 16050-130 100ml  incubation media 马血清 供体动物的EIA检测呈阴性 新西兰 16050-130 100ml    MAP1LC3B LC3B / MAP1LC3B 蛋白 (His 标签) Protein
热灭活马血清 供体动物的EIA检测呈阴性56°下加热30分钟进行热灭活 新西兰 26050-070 100ml  incubation media 热灭活马血清 供体动物的EIA检测呈阴性56°下加热30分钟进行热灭活 新西兰 26050-070 100ml    DAPK3 Protein Human  DAPK3 / ZIPK 蛋白 (GST 标签)
26050-088 500ml  incubation media 26050-088 500ml    CXCL13 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CXCL13 / BCA-1 / BLC 蛋白 (His 标签)
山羊血清 采集自供体动物 新西兰 16210-064 100ml  incubation media 山羊血清 采集自供体动物 新西兰 16210-064 100ml    AARS AARS / alanyl-tRNA synthetase 蛋白 (His 标签) Protein
16210-072 500ml  incubation media 16210-072 500ml    T-细胞免疫调节因子1(TCIRG1)重组蛋白 Recombinant T-Cell, Immune Regulator 1 (TCIRG1)
25L  incubation media 25L    CXCL11 I-TAC / CXCL11 蛋白 Protein
Recombinant Human NFYA定位显色培养基 用于尿道细菌分离和鉴别，也可用于伤口感染标本的病原菌分离 1000ml  incubation media 定位显色培养基 用于尿道细菌分离和鉴别，也可用于伤口感染标本的病原菌分离 1000ml    DAPK3 Protein Human  DAPK3 / ZIPK 蛋白 (GST 标签)
25L  incubation media 25L    EPCAM Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 / 恒河猴 EpCAM / TROP-1 / TACSTD1 蛋白
大肠杆菌显色培养基 用于大肠杆菌鉴定和计数 1000ml  incubation media 大肠杆菌显色培养基 用于大肠杆菌鉴定和计数 1000ml    IL1R1重组食蟹猴 IL1R1 蛋白 (His 标签) Protein
ECC显色培养基 用于大肠杆菌和大肠菌群的鉴定和计数 1000ml  incubation media ECC显色培养基 用于大肠杆菌和大肠菌群的鉴定和计数 1000ml    Integrin Alpha3 整合素α3抗原 0.5mgIntegrin Alpha3 整合素α3抗原
25L  incubation media 25L    EPHA4 EphA4 蛋白 (His & Fc 标签) Protein
重组蛋白质为非可溶性蛋白（ 变性条件下）的分离纯化1. 将菌体沉淀溶于适量裂解液 2（Lysis buffer under denaturing conditions ）中，室温下搅拌和吹打沉淀，避免泡沫生成。
2. 10000g ，4 oC，离心 30 min，收集上清液。
3. 将 Ni-NTAAgarose 充填柱子，并连接于 Pharmarcia 低压液相层析系统，用 5 倍柱体积的裂解液 2 平衡 Ni-NTAAgarose，调节 A280 值至零线。
4. 将适量上清液上样到 Ni-NTAAgarose 柱子中， 并用 lysis buffer 冲洗至 A280 值低于 0.01。
5. 分别用 5 ～ 10 倍柱体积的清洗液 1 和清洗液 2（Washbuffer 1 and 2）清洗柱 子，直至 A280 值低于 0.01。
6. 用洗脱液（Elution buffer）洗脱重组蛋白质， 在 A280 值监测下，收集出现峰 线后含有重组蛋白的所有洗脱液。 ​​​​​​​ ​​​​​​​